欖形風車子萜類提取物對四種癌細胞的增殖抑制作用

張 園 劉紹華 楊 婕 李俊燕 肖志慧 文 檢

(萍鄉衛生職業學院 江西省萍鄉市 337000)

癌癥已成為我國疾病死因之首，發病率和死亡率還在攀升。肺癌、胃癌、肝癌、食道癌、結直腸癌，占到了所有癌癥死亡的四分之三。目前化學藥物抗腫瘤作用確切，療效顯著，但是毒副作用大，長期應用易產生耐藥性，所以人們迫切希望找到療效好且毒副作用小的藥物，中藥在這方面顯示出了明顯的優勢。風車子屬植物的抗腫瘤活性已被多人證實，并且從風車子中提取出的二苯乙烯類風車子抑素已被證實療效確切。欖形風車子（Combretum olivaeforme Chao）為使君子科、風車子屬攀援灌木。風車子屬植物我國約有12 種，包括風車子、十蕊風車子、欖形風車子、長毛風車子、崖縣風車子等。風車子屬植物具有止瀉、驅蛔蟲、抗炎、抗癌和殺菌等作用[1]。國內外報道的風車子屬植物的化學成分主要以二苯乙烯類、三萜化合物及菲類化合物為主。目前還未見欖形風車子抗腫瘤作用的研究，而其他天然藥物中萜類化合物抗腫瘤作用明確，所以我們提取了欖形風車子葉片中的萜類化合物，采用MTT 法，檢測其對四種癌細胞的體外增殖抑制作用，為進一步的研究提供基礎數據。

1 材料與方法

1.1 材料

全波長酶標HBS-109（上海博升科技有限公司）；細胞培養箱（上海博升科技有限公司）；倒置顯微鏡（重慶光學儀器廠）；潔凈工作臺（上海博迅醫療設備廠）；全自動高壓蒸汽滅菌鍋（上海申安LDZX-50KBS）；可調式移液器（BRAND 公司）；96 孔細胞培養板（Pore 公司）；RPMI1640 培養液、胰酶（Gibco 公司）；四甲基偶氮唑藍（MTT，Sigma 公司）；超級新生牛血清（杭州四季青生物科技有限公司）；二甲基亞砜（DMSO，天津市化學試劑二廠）。人肺腺癌細胞（SPCA-1）、人肝癌細胞（BEL-7402）、人胃癌細胞（SGC-7901）和人白血病細胞（K562）由中科院上海生物所提供[2]。細胞用含10%胎牛血清、100 μg/ml 青霉素、100 μg/ ml 鏈霉素、0.2%NaHCO3的RPMI1640 培養液，于37 ℃、5%CO2飽和濕度的培養箱中培養。欖形風車子葉片。

1.2 實驗方法

1.2.1 欖形風車子中萜類化合物的提取與分離

干燥的欖形風車子葉，粉碎，用70%乙醇回流提取3 次每次1h，減壓回收乙醇至無醇味的浸膏。加入適量的水混懸后，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。石油醚部位用80%乙醇溶解，石油醚萃取，將80%乙醇層減壓回收至浸膏。

1.2.2 MTT 法檢測萜類提取物對四種癌細胞的增殖抑制作用

以2×104的密度將細胞接種于96 孔板中，培養12h 后加入不同濃度（1μM、10μM、100μM）提取物20μL，另設對照組。分別培養12h、24h、48h 后加入5mg/mL 的MTT50μL，繼續培養4h，終止培養，吸去培養液，加入150μL DMSO，避光振蕩5min，酶聯免疫檢測儀OD 值570nm 處測量吸光值，計算抑制率和半數抑制濃度（IC50）。抑制率計算公式：抑制率(%)={[A(對照)-A(給藥組)]/A(對照)}×100。

1.2.3 結果統計

每份樣本平行測定6 孔，全部數據用SPSS13.0 統計軟件包進行統計分析。吸收值以均數±標準差(x±s)表示，采用方差分析比較組間均數差異。

2 結果分析

2.1 實驗結果

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2.2 結果分析

數據顯示，從欖形風車子中的萜類提取物對四種癌細胞都有較好的抑制作用，并且隨著濃度的增加抑制作用都增強。其中對人肺腺癌細胞（SPCA-1）、人肝癌細胞（BEL-7402）和人白血病細胞（K562）的IC50（半數抑制濃度）都小于15μM，抑制效果最好的是人肺腺癌細胞（SPCA-1），IC50 （半數抑制濃 度）為7.31μM。說明該植物中的萜類化合物對人肺腺癌細胞（SPCA-1）的抑制作用最為顯著，提示欖形風車子對肺癌具有潛在的治療作用。可以進行進一步的研究。后期我們會分離出不同的萜類化合物并做結構鑒定，選取其中活性最好的單體化合物進行初步的抗癌機制研究。