氣相色譜-三重四級桿質譜法測定菜籽油中40種農藥殘留

李潔 梁藝馨 王興寧

摘要?[目的]建立氣相色譜-串聯質譜法測定菜籽油中40種農藥殘留的檢測方法。[方法]考察不同提取劑的提取效果，比較氟羅里柱和中性氧化鋁C18小柱、Agela TPT-spe小柱和Agela PC/NH2-SPE小柱對樣品的凈化效果，優選出以乙腈提取、Agela TPT-spe柱凈化的試驗條件，GC-MS-MS采用多反應監測模式（MRM）。[結果]40種農藥在0.05～0.40 mg/L滿足線性關系，?r>?0.99，檢出限在0.000 1～0.008 0 mg/kg;在0.04～0.40 mg/kg進行了3個濃度水平的加標回收試驗，回收率在78%～110%，相對偏差（RSD，?n?=6）小于10%。[結論]該方法靈敏度高、選擇性好、抗干擾能力強，適合菜籽油中40種農藥殘留的準確定量和定性分析。

關鍵詞?氣相色譜-三重四級桿質譜法;菜籽油;農藥殘留

中圖分類號?TS207.5+3?文獻標識碼?A

文章編號?0517-6611（2020）14-0187-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.14.053

Abstract?[Objective]To establish a gas chromatography-tandem mass spectrometry method for the simultaneous determination of 40 pesticide residues in rapeseed oil.[Method]The extraction effects of different extraction regents were compared and the purifying effects of Flerpillar column，Neutral alumina column， cleanert C18 solid phase extraction column ，cleanert TPT solid phase extraction column and cleanert PC/NH2 solid phase extraction column were also investigated.The optimum pretreatment conditions for the rapeseed oil samples were determined as follows： extracting the rapeseed oil samples by n-hexane followed by cleanert TPT column purification.The purified samples were then analyzed by GC-MS/MS with MRM mode，and quantified by internal standard method.[Result]A good linear relationship was established in the 40 pesticide residues concentration range of 0.05-0.40 mg/L and the correlation coefficient was above 0.99.At the spiked levels of 0.04-0.40 mg/kg， the average recoveries of difenoconazole at three spiked concentration levels ranged from 78% to 110% with the relative standard deviation less than 10%（?n?=6）.[Conclusion]The method has high sensitivity， good selectivity and strong anti-interference ability， and is suitable for accurate quantitative and qualitative analysis of 40 pesticide residues in rapeseed oil.

Key words?Gas chromatography-triple quadrupole mass spectrometry;Rapeseed oil;Pesticide residues

菜籽油是我國主要的食用油之一，主產于長江流域及西南、西北等地，產量居世界首位。油菜在種植過程會使用有機磷、有機氯和擬除蟲菊酯農藥等進行病蟲害的防治，菜籽油的農藥殘留安全問題也越來越受關注。近年來對食用植物油中農藥殘留檢測的方法有凝膠滲透色譜（GPC）法[1]、分散固相萃取法[2-4]和固相萃取法等，GPC法處理繁雜、耗時長;分散固相萃取法對菜籽油中復雜的成分和色素不能有效的去除和凈化。采用固相萃取法氣相色譜法[5]、固相萃取法氣相色譜質譜法[6-7]測定食用植物油中農藥殘留，對花生油、大豆油等色素含量低、基質相對簡單的植物油有很好的去除效果，但對菜籽油提取凈化效果不好，干擾大，基質效應高。筆者針對近幾年來植物油中農藥殘留檢測的方法進行優化，結合氣相色譜-三重四級桿質譜儀進行檢測。

1?材料與方法

1.1?試驗材料

1.1.1?試材。菜籽油，由貴陽海關綜合技術中心提供。

1.1.2?主要儀器。Agilent 70890B氣相色譜儀，美國安捷倫公司;Agilent 7000C三重四級桿串聯質譜儀，EI離子源，美國安捷倫公司;Allegra X-30R 高速離心機，美國貝克曼庫爾特有限公司;TurboVap LV氮吹儀，美國Biotage公司;waters濾膜，沃特斯公司;電子分析天平，梅特勒公司;TALBOYS渦型振蕩器，美國Talboys。

1.1.3?試劑。乙腈、丙酮、正己烷均為色譜純;二甲苯分析純;無水硫酸鈉為農殘級;水為超純水;固相萃取小柱。

標準品，由北京墨壇質檢科技有限公司生產，含量100 μg/mL，使用時用丙酮稀釋成10 μg/mL標準溶液，于-4 ℃條件下貯存。

1.2?色譜-質譜條件

色譜柱：DB-5;進樣量：1 μL 不分流;柱流量：1?mL/min;程序升溫：60 ℃保持1 min，40 ℃/min升至220 ℃，然后5 ℃/min升至280 ℃保持6 min;進樣口溫度：250 ℃;隔墊吹掃流量3?mL/min;載氣He，純度≥99.999 5%;傳輸線溫度280 ℃;離子源：電子轟擊離子源（EI源），溫度280 ℃;多反應監測模式（MRM）;碰撞氣 N2，純度≥99.999 5%。目標物的相關信息見表1。

1.3?樣品處理

1.3.1?樣品提取。準確稱取2.5 g菜籽油樣品于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈、2.5 mL超純水和2.5 g氯化鈉，振蕩5 min，以5 000 r/min離心5 min，吸取上清液于30 mL玻璃試管中，下層重復提取1次。合并2次提取液，用37 ℃氮吹至1?mL左右，待凈化。

1.3.2?樣品凈化。先在TPT固相萃取柱中，加入2?mL無水NaSO4，用4?mL乙腈+甲苯（3∶1，?V/V?）預淋洗，棄淋洗液，再將樣品濃縮液轉移至凈化柱中，并用30?mL干凈玻璃試管接收，用3?mL乙腈+甲苯（3∶1，?V/V?）將殘留樣液轉移至萃取柱中，此操作重復3次，用15?mL乙腈+甲苯（3∶1，?V/V?）洗滌小柱，將上述所有洗滌液收集于玻璃試管中，于37 ℃氮吹至近干，加1?mL丙酮+正己烷（1∶1，?V/V?）溶解，過濾膜，待上機測定。

1.4?標準曲線的繪制?取標準儲備液，分別配制成濃度為0.05、0.10、0.20和0.40 mg/L的標準溶液，在選定色譜、質譜條件下上機測定其響應值，并以標準溶液濃度為橫坐標、定量離子對應色譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線。

2?結果與分析

2.1?提取方式?根據文獻[8-12]，用于菜籽油的農藥殘留提取溶劑有乙腈、正己烷、乙酸乙酯。試驗發現用正己烷提取得到的雜質偏多，乙酸乙酯與乙腈比極性偏小，在提取油脂時可將一些非極性親脂性的干擾物質提取出來，提取出的樣品雜質較乙腈多，用乙腈和甲醇2種溶劑作為提取劑，提取出的油脂和雜質都相對較少。因此該研究在進行提取試劑的優化試驗時選擇用乙腈和甲醇2種溶劑作為提取溶劑，設置了3種提取方案，分別是：①2.5 g油與2.5 mL 水混合，用10 mL乙腈提取，共提取2次，合并提取液;②2.5 g油與2.5 mL 水及2.5 mL正己烷混合，以乙腈提取，共提取2次，合并提取液;③2.5 g油，用10 mL甲醇提取，提取2次合并提取液。其平均回收率分別為80%～110%、75%～106%、30%～45%，說明用甲醇提取溶液的雜質較少，但對農藥提取的回收率明顯低于前2種提取液，①、②2種提取方式的回收率相當，但①提取過程較②簡單易操作，因此，建議用①作為菜籽油中農藥殘留檢測的提取溶劑。

2.2?凈化條件?菜籽油基質復雜，色素含量多，干擾大，提取后需要經過有效凈化，除去大量的色素、油脂和其他基質，避免干擾測定。氟羅里柱和中性氧化鋁能有效地除去樣液的脂肪，但對色素和其他雜質的凈化能力弱;C18小柱能除去樣液中大多數色素，但對脂肪和其他雜質的凈化效果不佳;Agela TPT-spe小柱和Agela PC/NH2-SPE都既能有效去除色素又能除去脂肪和其他雜質的能力，試驗向陰性菜籽油樣品中添加0.4 mg/kg水平的32種農藥標液，考察2種小柱的凈化能力，在“1.2”的條件下測定，計算各農藥的加標回收率，結果見圖1。Agela PC/NH2-SPE小柱凈化后樣液呈淺黃色，基質凈化不干凈，基質干擾大，部分農藥的回收率高于120%。Agela TPT-spe小柱凈化后樣液呈透明無色，且農藥的回收率在80%～110%，對菜籽油的凈化較Agela PC/NH2-SPE強。所以該試驗采用Agela TPT-spe小柱進行樣品凈化。

2.3?線性范圍和檢出限

按“1.4”方法操作，以標準溶液濃度為橫坐標、定量離子對應色譜峰面積為縱坐標繪制標準曲線，求得線性方程及相關系數。以?S/N=3計?算方法中農藥的檢出限（LOD），?S/N?=10計算方法中農藥的定量限（LOD），線性范圍、線性相關系數及檢出限、定量限見表2 ，40種農藥及相關代謝物混合標準溶液的總離子（TIC）圖見圖2。

2.4?精密度和回收率?向菜籽油樣品中加入40種農藥標準品的混合溶液，按照“1.3”樣品處理步驟，在“1.2”儀器工作條件下平行測定6次，測得數據見表3。由表3可知，40種農藥測定結果的相對標準偏差（RSD）大多數均小于4（?n?=6）。在相應線性范圍內進行3個水平（0.04、0.20、0.40 mg/kg）加標回收試驗，40種農藥的回收率結果見表3。由表3可知，40種農藥的回收率在80%～110% ，滿足NY/T 788—2004[13]中的回收率范圍和相對標準偏差[14-15]要求。說明方法的精密度和選擇性較好、靈敏度和準確度較高、抗干擾能力較強，符合食品農藥殘留檢測要求，適合用于菜籽油中農藥殘留檢測的準確定量和定性分析。

3?結論

該研究建立了氣相色譜-三重四級桿質譜法測定菜籽油中多種不同類型農藥殘留量的方法，用乙腈提取，Agela TPT-spe小柱進行凈化的前處理方法既能有效去除色素又能除去脂肪和其他雜質，消減了因凈化不干凈引起的基質效應對檢測結果的影響。用三重四級桿串聯氣相色譜-質譜聯用儀（GC-MS/MS）檢測， 靈敏度較高、選擇性較好、抗干擾能力較強，不用進行基質匹配直接用外標法定量，簡化了試驗步驟，縮短試驗所需時間，降低菜籽油農藥殘留實際檢測中的假陽性和誤判率，該方法的靈敏度、準確度和精確度均符合農藥殘留檢測要求，具有一定新穎性和實用性。

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