急性腹瀉患者非傷寒沙門菌的耐藥性檢測和基因分型研究

李立巍

（桂林市疾病預防控制中心 檢驗科，廣西 桂林 541001）

沙門氏菌可以食物為媒介傳播至餐桌，也可通過生物媒介如感染者或帶菌者傳播，從而導致感染性腹瀉的發生。在我國，因沙門氏菌感染導致的腹瀉比例遠高于其他細胞[1]。頭孢類抗菌藥為現階段臨床上治療沙門氏菌的常用藥，此外，四環素類/喹諾酮類等也常用于該菌感染導致的腹瀉治療[2]。但因我國抗生素濫用問題嚴重，導致沙門氏菌耐藥種類不斷增多，耐藥率也呈現逐年上升趨勢[3]。本研究對某區疾病預防控制中心檢測，收集的急性腹瀉患者糞便標本檢出的沙門氏菌進行藥敏檢測，對沙門氏菌的藥敏特點和相關耐藥基因進行探討，明確本地區沙門氏菌耐藥性發展趨勢。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年某區疾病預防控中心收集的急性腹瀉患者糞便標本8702例，由上述標本中檢測沙門氏菌，檢出沙門氏菌后應按照《WS/T454-2014 從業人員預防性健康檢查 沙門菌志賀菌檢驗方法》進行復核，隨后在采用沙門氏菌屬診斷學血清確認血清型。

1.2 方法

1.2.1 抗生素敏感試驗

本研究藥敏試驗抗菌藥物選取15種，即為氨芐西林、阿奇霉素、舒巴坦、慶大霉素、四環素、頭孢西丁等；檢測方法和結果判斷標準參考肉湯稀釋法。質控菌株為購自美國菌種保存中心的大腸埃希菌ATCC25922。

1.2.2 耐藥基因鑒定

選擇耐第一代喹諾酮類藥物萘啶酸的菌株進行基因型鑒定和序列分析。采用DNA提取試劑盒提出基因組為模版，嚴格按照試劑盒說明書操作，PCR轉錄完成后采用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增結果。PCR產物由上海生工生物工程技術服務有限公司測序。測序結果采用相關軟件進行編輯處理，隨后在采用BLAST程序在GenBank數據庫中進行對比，確定突變點和突變種類。

2 結 果

2.1 沙門氏菌檢出率

某區疾病預防控中心收集的急性腹瀉患者糞便標本8702例，其中檢出沙門氏菌286例（3.29%）。

2.2 286例沙門氏菌血清型

本研究中共檢測出沙門氏菌血清型51種，其中腸炎沙門氏菌最多，為67例（23.4%）；其他血清型比例為：鼠傷寒沙門氏菌43例（15.0%），拉古什沙門氏菌24例（8.4%），都柏林沙門氏菌15例（5.2%），布利丹沙門氏菌15例（5.2%），湯卜遜沙門氏菌10例（3.5%），阿貢納沙門氏菌9例（3.1%），倫敦沙門氏菌7例（2.4%），科特布斯沙門氏菌7 例（2.4%），其他沙門氏菌89例（31.1%）。

2.3 沙門氏菌對抗菌藥敏感性檢測

本研究中，沙門氏菌主要對紅霉素（100.0%）、氨芐西林（68.9%）、四環素及萘啶酸（52.8%）耐受。而沙門氏菌中多重耐藥率則可達65.0%，最多可耐受8類抗菌藥。結果見表1。

表1 某區疾病預防控制中心沙門氏菌耐藥情況分析

2.4 286例沙門氏菌耐藥基因鑒定

與野生型敏感株細菌的Ty2基因序列對比研究發現，耐萘啶酸沙門氏菌gyrA基因在Ser83位或Asp87位密碼子發生基因突變，各種基因突變所占比例分別為：Ser83→Phe為68例（45.3%），Asp87→Asn為48例（32.0%），A s p 8 7 →G l y 為2 0 例（1 3.3%），A s p 8 7 →Ty r 為13例（8.7%）。gyrB、parC和parE基因未發現發生基因突變。

3 討 論

沙門氏菌是一種可對機體健康造成嚴重影響的致病菌，其血清型種類較多，抗原較為復雜，現階段已鑒定出的血清型超過了3000種，時導致食源性腹瀉的重要因素之一。沙門氏菌感染在不同國家均有較高的發病率，但在發展中國家具有較高的死亡率[1]。沙門氏菌導致的傳染病對人類發展具有重大的影響，即使現階段，沙門氏菌感染對發展中國家亦可造成不利影響[2]。近些年來，隨著傷寒和副傷寒發病率的降低，而非傷寒沙門氏菌的感染率則呈現逐年上升趨勢，且由于抗生素濫用導致非傷寒沙門氏菌耐藥譜逐漸加寬。因此，清華對非傷寒沙門氏菌耐藥性的監測，對于控制非傷寒沙門氏菌感染流行具有重要意義。

本研究結果表明，某區疾病預防控中心沙門氏菌檢出率為3.29%；沙門氏菌主要血清型為腸炎沙門氏菌（23.4%）、鼠傷寒沙門氏菌（15.0%）、拉古什沙門氏菌（8.4%）；沙門氏菌主要對紅霉素（100.0%）、氨芐西林（68.9%）、四環素及萘啶酸（52.8%）耐受，而沙門氏菌中多重耐藥率則可達65.0%，最多可耐受8類抗菌藥；耐萘啶酸沙門氏菌gyrA基因在Ser83位或Asp87位密碼子發生基因突變，而gyrB、parC和parE基因未發現發生基因突變。

綜上所述，某區疾病控中心監測的非傷寒沙門氏菌耐藥情況較為嚴重，血清型與其他地區分布存在一定的差異，而其中喹諾酮類耐藥基因gyrA基因變異為引起非傷寒沙門氏菌產生耐藥的主要作用。