快速制備鼻腔給予LPS誘導帕金森病動物模型及評價①

宋國斌 席國萍 李艷花 尉杰忠 劉春云 李凱軍 柴 智 馬媛媛 肖保國 張光先 馬存根

(山西大同大學腦科學研究所,神經炎癥變性疾病基礎與應用研究山西省重點實驗室，大同 037009)

帕金森病(Parkinson′s disease，PD)又名震顫麻痹，是僅次于阿爾茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)的第二大神經系統變性疾病，主要病理特征為黑質多巴胺能神經元變性、缺失，黑質多巴胺能神經元胞質內以α-突觸核蛋白為主要成分的嗜酸性路易小體(lewy body，LB)的形成及黑質-紋狀體通路以多巴胺(dopamine，DA)為代表的單胺類神經遞質的減少[1-4]。研究表明，炎癥在PD的發病中起重要作用，腦內小膠質細胞(microglia，MG)介導的炎癥反應與PD存在重要聯系[5-8]。脂多糖(lipopolysa-ccharide，LPS)是革蘭氏陰性菌細胞壁的主要成分，可通過激活MG來刺激機體產生炎癥反應[9,10]。研究顯示，LPS可通過黑質內注射、蒼白球注射、紋狀體注射和腹腔注射等途經引起黑質多巴胺能神經元缺失，制備PD動物模型[11,12]。LPS經鼻腔途徑給予可誘導PD動物模型，但需時5個月[13]。本研究通過LPS經鼻腔小劑量、多次給藥的方式，以期加快PD動物模型的制備，縮短PD發病機制及治療效果的研究周期。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 SPF級健康雄性C57BL/6小鼠18只，6～7月齡，體質量30～33 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司(動物實驗遵照山西大同大學生物醫學研究倫理審查委員會規定執行)。

1.1.2藥物及試劑 LPS(Sigma公司)；兔抗酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)抗體(EMD Millipore公司)；兔抗α-突觸核蛋白抗體、二抗Anti-rabbit IgG Alexa Flour 488(Cell Signaling Technology公司)；二抗HPR-goat anti-rabbit IgG(EARTH公司)；顯影液ECL(Life Sciences公司)；辛基磺酸鈉(octanesulfonic acid sodium salt，OSA)、去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)、腎上腺素(epinephrine，E)標準品、DA標準品、3,4-二羥……