染料木素對乳腺癌細胞睪丸特異性蛋白酶50表達的影響①

馮 磊 李 響 孟繁平 李 妍

(延邊大學醫學院免疫學與病原微生物學教研室，延吉 133002)

乳腺癌作為女性發病率最高的腫瘤，嚴重危害女性健康[1]。亞洲人廣泛攝取雌激素結構類似物，即植物性雌激素的豆科植物及中藥材，染料木素(genistein，Gen)等植物性雌激素的日常飲食攝入是否可促進乳腺癌細胞生長尚存爭議[2-4]。睪丸特異性蛋白酶50(testes-specific protease 50，TSP50)是近年發現的促癌基因，與乳腺癌復發密切相關[5]。約70%乳腺癌為雌激素受體陽性型(ER+)，內源或外源雌激素對癌細胞有生長促進作用[6]。本研究通過探討不同濃度Gen對人乳腺癌細胞中TSP50表達的影響，闡明植物性雌激素對乳腺癌細胞增殖的影響，為揭示TSP50在雌激素非基因組中的效應提供研究依據。

1 材料與方法

1.1材料 人乳腺癌細胞株MCF-7和MDA-MB-231購自中南大學湘雅醫學院；1640培養液、馬血清購自美國Gibco公司；DMEM/F12培養基購自美國Hyclone公司；胎牛血清購自美國Corning公司；TSP50兔抗人免疫組化抗體購自美國Novus公司；通用型二抗購自北京中杉金橋公司；垂直板電泳槽購自美國伯樂公司；流式細胞儀購自美國貝克曼公司；酶標儀購自北京普天公司。

1.2方法

1.2.1細胞培養 復蘇MCF-7細胞接種于10% 1640培養液的培養瓶中，置于37℃、5%CO2增殖培養，培養瓶中細胞生長超過80%時，胰酶消化傳代至達到實驗所需細胞量。

1.2.2MTT還原實驗 取對數期MCF-7細胞鋪于96孔板給藥，24 h后取上清，加入新的含血清培養基200 ml/孔，按1∶10加入MTT試劑，37℃培養。4 h后終止培養，每孔加入200 μl DMSO溶解甲臢結晶，37℃溫育10 min，將結晶溶解后的液體分裝于96孔酶標板內，每份設置3個復孔，200 μl/孔，酶標儀490 nm 處檢測各孔吸光度值，取3次試驗平均值。……