GW4064對LPS誘導的RAW264.7細胞中炎癥反應的影響①

李淑玲 郭明洲 仉子軒 李 聞

(中國人民解放軍總醫院，解放軍醫學院，北京 100853)

GW4064是一種已知的膽汁酸核法尼醇X受體(farnesoid X receptor，FXR)的小分子激動劑,FXR受體參與機體的代謝及炎癥的調節。FXR不僅在肝臟、腸道和腎臟中表達，在免疫細胞中也同樣發現了FXR的表達[1-3]。最新研究發現FXR可抑制NLRP3的激活從而調節NLRP3相關的炎癥反應[4]。GW4064通過激活FXR可下調肝臟NF-κB信號的激活，進一步調控肝臟炎癥的發生發展[5]。雖然目前有大量的研究顯示FXR基因具有抗炎作用，但是對于FXR激動劑GW4064對LPS導致炎癥反應的作用及機制有待深入研究；而巨噬細胞是參與炎癥反應的主要免疫細胞，巨噬細胞在激活后可產生各種炎癥介質。脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是革蘭氏陰性細菌細胞壁的一個組成部分，可激活巨噬細胞釋放炎癥介質，包括一氧化氮(NO)、炎癥細胞因子(如IL-1β、TNF-α等)；而NO主要受活化巨噬細胞在炎癥狀態下iNOS過表達的影響而產生[6]。 因此，本研究主要探討LPS刺激的RAW264.7巨噬細胞模型中GW4064對促炎因子的分泌和釋放，iNOS表達和NO產生的影響，為GW4064在免疫細胞中的抗炎作用提供進一步的依據。

1 材料與方法

1.1材料 小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞株購自北京協和細胞庫；GW4064購自Selleck公司；胎牛血清(FBS，10099141)購自Gibco公司；DMEM培養基和雙抗(青霉素+鏈霉素)購自Hyclone公司；二甲基亞砜(DMSO)購自Amresco公司；內毒素(LPS)購自Sigma公司；iNOS抗體、NF-κB抗體、β-actin抗體購自Abcam公司；p-NF-κB抗體購自CST公司；HRP標記山羊抗兔IgG(H+L)、HRP標記山羊抗小鼠IgG(H+L)購自碧云天生物技術有限公司；引物購自華大基因研究中心；逆轉錄試劑盒購自Invitrogen公司;SYBR Green Realtime PCR Master Mix購自ToYoBo公司；AimPlex流式高通量多因子購自曠博生物科技有限公司?！?br>