酶底物法檢測生活飲用水總大腸菌群的效果觀察

馬惘卿 包蕾（通訊作者） 吳林蔚 向正華 鄭超

（云南省玉溪市疾病預(yù)防控制中心 云南 玉溪 653100）

生活飲用水能夠維持人體細(xì)胞形成，促進(jìn)身體機(jī)能新陳代謝，還能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞組織和血液。按照我國食品安全標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定顯示，在飲用水中不再保留菌落總數(shù)。過度殺菌或者控制衛(wèi)生指示菌可能會(huì)在一定程度上增加飲用水當(dāng)中的酸鹽含量，導(dǎo)致風(fēng)險(xiǎn)因素發(fā)生。飲用水能夠促進(jìn)人體吸收，并且將體內(nèi)廢棄物排除掉[1]。生活飲用水會(huì)直接影響人們的生活與生存，加大飲用水微生物檢測力度，能夠提升飲用水安全性。此次研究主要是探討分析生活飲用水總大腸菌群檢驗(yàn)使用兩種不同檢驗(yàn)方法的應(yīng)用效果，現(xiàn)將此次研究報(bào)告作如下匯報(bào)：

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇某檢驗(yàn)科所抽檢的水樣共計(jì)500 份，隨機(jī)分為對照組和研究組，每組共有水樣250 份。對飲用水進(jìn)行細(xì)菌檢驗(yàn)，采集水樣于相應(yīng)試管內(nèi)。

1.2 方法

對照組水樣采用總大腸菌群多管發(fā)酵法，具體如下：此種方法需要通過生化培養(yǎng)，選取10ml 水樣共計(jì)5 份，接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中（10ml），之后選取樣本接種到乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，選擇樣本于生理鹽水中混合均勻，選擇樣本于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。對處理的水樣進(jìn)行檢測和雙料培養(yǎng)[2]。將水樣放置于培養(yǎng)箱內(nèi)，時(shí)間控制在20h 左右。陰性標(biāo)準(zhǔn)：培養(yǎng)管無產(chǎn)酸產(chǎn)氣；陽性：培養(yǎng)管產(chǎn)酸產(chǎn)氣。之后按照MPN 檢索表，對水樣中的總大腸菌群MPN 值進(jìn)行報(bào)告。

研究組應(yīng)用酶底物法，具體措施如下：選取水樣100ml，添加2.7g 培養(yǎng)基粉末，混合均勻。待其完全溶解后，需要放置于培養(yǎng)箱（36 攝氏度）內(nèi)，培養(yǎng)時(shí)間控制在24h。將無菌稀釋瓶中置入100ml 水樣，添加2.7g 培養(yǎng)基粉末，混合均勻。待其完全溶解后，選擇滅菌試管（10 支，15×10mm），通過無菌吸管從稀釋瓶中吸取水樣10ml，置入試管內(nèi)，并且放置于培養(yǎng)箱（36攝氏度）內(nèi)，培養(yǎng)時(shí)間控制在24h。觀察培養(yǎng)后的水樣，當(dāng)試管內(nèi)水樣變?yōu)辄S色，表示存在總大腸菌群。當(dāng)試管內(nèi)水樣非黃色時(shí)，則表示無總大腸菌群[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用專業(yè)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件（SPSS20.0）處理和分析所有患者數(shù)據(jù)資料，采用χ2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料，并且使用百分比表示，P＜0.05為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

在分別檢驗(yàn)兩組樣品之后，對照組檢驗(yàn)合格率為95.2%；研究組檢驗(yàn)合格率為97.6%，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表。

表 兩種方法檢測樣品的合格率比較

3.討論

生活飲用水在人類生產(chǎn)生活中占據(jù)重要地位，在經(jīng)濟(jì)發(fā)展過程中，也帶來了嚴(yán)重的環(huán)境污染問題，導(dǎo)致飲用水微生物污染問題加劇。生活飲用水微生物檢測指標(biāo)能夠?qū)λ|(zhì)生物污染進(jìn)行評價(jià)。因此為了維護(hù)生活飲用水安全性，必須采用快速有效的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。總大腸菌群是需氧菌和厭氧菌在生長期間，促使乳糖發(fā)酵，且產(chǎn)生革蘭陰性無芽孢桿菌。總大腸菌群不僅存在于糞便當(dāng)中，也存在于其他環(huán)境中[4]。總大腸菌群的檢測，對于檢測人員的技術(shù)水平、檢測設(shè)備以及檢測環(huán)境的要求比較高，且檢測時(shí)間比較長，因此在實(shí)際應(yīng)用過程中，能夠提升總大腸菌群的準(zhǔn)確性。現(xiàn)階段，在檢驗(yàn)生活飲用水中的總大腸菌群時(shí)，多應(yīng)用酶底物法和多管發(fā)酵法，以上兩種方法的檢測結(jié)果均具備準(zhǔn)確性。當(dāng)水質(zhì)達(dá)標(biāo)時(shí)，能夠確保人們安全放心地飲用水源，還能夠?qū)ι铒嬘盟陌踩c質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)督。當(dāng)飲用水存在處理不達(dá)標(biāo)和不潔凈問題時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致水中出現(xiàn)微生物細(xì)菌污染。當(dāng)生活飲用水供應(yīng)管道產(chǎn)生破損，二次供水存在問題時(shí)，就會(huì)污染生活飲用水。所以必須注重生活飲用水的微生物細(xì)菌檢驗(yàn)。通過此次調(diào)查檢驗(yàn)?zāi)軌蚩闯觯还苁嵌喙馨l(fā)酵法，還是酶底物法，都能夠提升檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，酶底物法應(yīng)當(dāng)作為生活飲用水微生物污染總大腸菌群的快速檢驗(yàn)方法。酶底物法用于清潔水樣中，能夠快速檢測結(jié)果，特別是對于應(yīng)急水樣。當(dāng)水樣的稀釋倍數(shù)越高時(shí)，檢測結(jié)果會(huì)存在下降趨勢。當(dāng)水樣稀釋倍數(shù)比較低時(shí)，且誤差比較小，則可以應(yīng)用酶底物法。

通過此次研究結(jié)果能夠看出，對照組檢驗(yàn)合格率為95.2%，研究組檢驗(yàn)合格率為97.6%，兩組水樣在檢驗(yàn)合格率上不存在顯著差異，P ＞0.05，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。比較分析不同檢測方法發(fā)現(xiàn)，多管發(fā)酵法的操作時(shí)間比較長，且檢測步驟復(fù)雜，必須進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。酶底物法便于操作，且檢測結(jié)果獲得時(shí)間短，能夠應(yīng)用到常規(guī)快速檢測中。不同檢驗(yàn)方法的結(jié)果一致性不存在顯著差異，即兩組方法的檢測數(shù)據(jù)基本一致，只是在檢驗(yàn)數(shù)據(jù)上存在差異性。酶底物法檢驗(yàn)可以應(yīng)用到大批量快速檢測中，且檢驗(yàn)過程中不會(huì)受到污染影響，能夠?qū)λ畼拥奈⑸镂廴厩闆r進(jìn)行準(zhǔn)確檢測和判斷。

綜上所述，總大腸菌群多管發(fā)酵法和酶底物法的檢測結(jié)果具備一致性特點(diǎn)，但是酶底物法便于操作，因此可以作為水質(zhì)污染的微生物總大腸菌群的標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)方法。