利用Trim-Away技術降低人胰島淀粉樣多肽在大鼠胰島素瘤細胞中的毒性

龔葭薇，孔德麟，楊琳，聶玉哲，梁洋，滕春波

研究報告

利用Trim-Away技術降低人胰島淀粉樣多肽在大鼠胰島素瘤細胞中的毒性

龔葭薇，孔德麟，楊琳，聶玉哲，梁洋，滕春波

東北林業大學生命科學學院，哈爾濱 150040

人胰島淀粉樣多肽(human islet amyloid polypeptide, hIAPP)又稱胰淀素(Amylin)，是胰島β細胞中胰島素的共分泌蛋白，與胰島素共同包裹在囊泡中被分泌出細胞。正常生理條件下，hIAPP有助于胰島素分泌并調節機體血糖平衡；但其蛋白錯誤折疊或過量積累則會對細胞造成毒性，進而影響β細胞功能，導致機體罹患2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)。為了清除細胞內過度積累的hIAPP，且不影響其正常的合成功能，本研究選用一種新的蛋白質降解技術——Trim-Away，該技術可以在短時間內降解目標蛋白質，且不會對靶蛋白的mRNA轉錄、翻譯等功能產生影響。首先在大鼠()胰島素瘤細胞(insulinoma cells, INS1)中過表達模擬其過度累積的情況，并通過乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)的釋放、CCK8 (cell counting kit-8)的活性以及PI-Annexin V流式檢測的陽性比例變化，證明hIAPP的過度積累造成β細胞的凋亡；通過實時定量PCR及ELISA檢測發現胰島素的合成和分泌都受到了阻礙；最后利用Trim-Away技術在過表達的INS1細胞中特異性清除了過度積累的hIAPP蛋白。細胞活性實驗證實清除hIAPP蛋白可以減少細胞的死亡，ELISA實驗證實INS1細胞恢復了胰島素的分泌能力。本研究驗證了hIAPP過度積累對INS1細胞的毒性作用，并且證明Trim-Away技術在清除胰腺β細胞中hIAPP毒性具有效果，為利用Trim-Away治療糖尿病提供了新的策略。

Trim-Away；人胰島淀粉樣多肽；β細胞；胰島素分泌

人胰島淀粉樣多肽(human islet amyloid poly-peptide, hIAPP)是一種由37 aa構成的神經內分泌多肽激素[1]，也被稱為胰淀素(amylin)[2]。……