miR-499a-5p通過靶向APC減輕氧化應激對心肌細胞的損傷

武國利 張寧 田蜜 田征 許金鵬 馬競 楊澤峰

【摘? 要】目的：探討miR-499a-5p通過靶向APC減輕氧化應激對心肌細胞的損傷。方法：將心肌細胞H9C2作為對照組，將H2O2用400μmol/L處理后建立氧化應激損傷模型作為模型組，對比兩組的組的細胞存活率、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、LDH活性、miR-499a-5p以及APC。結果：模型組LDH、MDA、APC明顯高于對照組，而SOD、miR-499a-5p明顯低于對照組（P<0.05）。結論：miR-499a-5p可調控H2O2誘導的心肌細胞的增殖、凋亡和氧化應激，其能靶向抑制APC，臨床可將抑制氧化應激反應作為保護心肌細胞損傷的治療新靶點。

【關鍵詞】氧化應激;心肌細胞損傷;miR-499a-5p;APC

國內有研究miR-449a在不穩定型心絞痛、急性冠脈綜合征、急性心肌梗死患者的血樣中高表達。也有研究中報道，miR-499a-5p在缺氧/復氧模型心肌細胞中表達水平顯著降低，過表達miR-499a-5p后細胞的凋亡率和乳酸鹽脫氫酶（LDH）活性均發生下調，其作用機制與靶向分化簇38（CD38）具有相關性，揭示miR-499a-5p可通過靶向CD38減輕缺氧/復氧引起的心肌細胞損傷[1]。還有報道，四甲基吡嗪（TMP）可以部分緩解缺氧引起的H9c2細胞中miR-449a的上調，并且miR-449a的過表達減弱了TMP對缺氧處理的H9c2細胞的治療作用，另外沉默信息調節因子1（Sirt1）是miR-449a的靶基因，揭示了TMP通過下調miR-499a，上調Sirt1，然后激活PI3K/AKT途徑部分緩解了缺氧引起的心肌細胞H9c2活力降低和凋亡促進。這暗示了miR-499a在缺氧誘導的H9c2細胞中表達異常上調[2]。本研究進一步分析miR-499a-5p通過靶向APC減輕氧化應激對心肌細胞的損傷，現具體匯報如下。

1 材料與方法

1.1材料：大鼠心肌細胞H9c2購自深圳市百恩維生物科技有限公司;DMEM培養基購自Hyclone公司;反轉錄試劑盒購自北京明陽科華生物科技有限公司;實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（qRT-PCR）試劑盒購自日本TaKaRa公司;丙二醛（MDA）檢測試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒檢測試劑盒均購自上海碧云天研究所。

1.2方法：①建立心肌細胞H9c2損傷模型。H9c2細胞培養時使用含DMEM培養基（10 %胎牛血清）進行常規的培養、傳代。將正常培養的H9c2細胞標記為對照組，將其用H2O2（100、200、400、800 μmol/L）處理4 h，檢測細胞的存活率，篩選400μmol/L的濃度建立氧化應激損傷模型，標記為模型組。②細胞存活率。采用CCK-8法檢測，收集細胞，取5×105個/mL的細胞200μL，加入96孔板，每孔再加入CCK-8反應液20μL，在490 nm波長下檢測細胞的吸光值（A490）。存活率（%）= A490實驗組/ A490對照組×100%。③miR-499a-5p、APC的表達檢測。采用qRT-PCR檢測。④SOD、LDH、MDA檢測。采用ELISA法檢測，按試劑盒說明書要求進行檢測。

1.3統計學方法 應用 SPSS20.0 統計學軟件，計量資料用均數±標準差（）表示，采用t檢驗，P<0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1兩組各項指標比較，見表1。

3 討論

氧化應激反應是引發心肌細胞凋亡的重要因素之一，miRNA在心血管疾病中的致病作用已被大量研究證實，但miR-499a-5p在心肌細胞損傷中的功能尚未完全清楚。miR-499-5p在心室肌中高度表達，在缺氧或氧化應激條件下，miR-499-5p表達明顯降低[3]。APC屬于一種生理抗凝劑，能夠發揮細胞調控作用，對心肌細胞的炎癥和凋亡有抑制作用。miR-499a-5p在H2O2誘導的心肌細胞損傷中明顯降低，并能升高APC水平，達到抑制氧化應激反應，保護受損心肌細胞的作用[4]。

綜上所述，miR-499a-5p通過靶向APC減輕氧化應激對心肌細胞的損傷，為臨床治療提供了新的靶點。

參考文獻

[1] 吳麗夢，李恩，周小翠等.miR- 499-5p干預對心肌梗死大鼠心肌細胞凋亡的影響[J].鄭州大學學報（醫學版），2018，53（5）：614-618.

[2] 范宗靜，吳旸，唐杰等.缺血再灌注損傷人心臟微血管內皮細胞凋亡基因Bcl-2、Bax的表達及黃芪多糖干預研究[J].中華中醫藥雜志，2017，32（12）：5603-5606.

[3] 建強，邢金平，來春林等.微RNA-98 在姜黃素保護缺氧-復氧心肌細胞損傷中的作用及其機制[J].中華生物醫學工程雜志，2019，25（2）：136-141.

[4] 崔瑞新，呂風華，岳瑩等.microRNA-499靶控的PI3K/Akt通路在大鼠缺血-再灌注心肌損傷中的作用[J].鄭州大學學報（醫學版），2016，51（6）：740.