β-連接蛋白在鑒別浸潤性小葉癌和浸潤性導管癌中的診斷意義

蔣煒杰

簡陽市人民醫院 病理科(簡陽 641400)

乳腺浸潤性小葉癌(invasive lobular carcinoma，ILC)是第二常見的乳腺惡性上皮性腫瘤，僅次于非特殊類型浸潤性導管癌(invasive ductal carcinoma, IDC), 約占浸潤性乳腺癌的5%～15%[1]。與IDC相比，ILC臨床表現與影像學檢查多不明顯，且具有特發性和雙發性，雖淋巴結轉移較IDC少見，但更傾向于發生肺、骨、胃腸道、子宮、卵巢及腦膜轉移[2]，因此準確的診斷對于ILC患者的治療策略制定具有重要的意義。然而有時組織學形態上ILC和IDC兩者較易混淆，因此選擇有效的免疫組織化學標記物檢測對于鑒別IDC和ILC至關重要。E-鈣粘蛋白(E-cadherin)及P120連接蛋白是目前臨床上常用的輔助鑒別指標，兩者在IDC中均表達于腫瘤細胞膜上，而在ILC中E-cadherin往往表達缺失，P120陽性部位在細胞質內。然而，約10%的ILC可出現E-cadherin的表達，且有時P120膜質定位難以判別，因此，急需新的標記物用以輔助IDC和ILC的區分[3]。

Wnt信號通路參與了多種腫瘤的增殖、遷移和轉化過程，其中β-連接蛋白(β-catenin)是Wnt通路活化的關鍵調控因子。同時，β-catenin與E-cadherin和P120在細胞膜上可相互結合構成復合物來維持細胞間連接的穩定性，是調控細胞間黏附能力改變的重要因子[4]，然而β-catenin在IDC和ILC的表達中是否也具有差異罕見文獻報道。本研究采用免疫組織化學染色法觀察β-catenin在IDC和ILC中的表達，并結合E-cadherin和P120的表達模式評價其輔助診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

本研究收集了四川省簡陽市人民醫院 2011年1月至2017年12月手術切除的乳腺癌病例51例為研究對象，全部患者均為女性，年齡32～63(45.00±2.48)歲，均因發現乳腺腫塊就診。其中IDC 32例，ILC 11例， 混合型癌(IDC+ILC)8例。所有病例術前均未進行化療或放療。

1.2 試劑與方法

組織標本常規 10% 中性福爾馬林固定， 石蠟包埋以4 μm厚度切片。免疫組化技術采用 EnVision 兩步法，染色步驟按說明書進行。即用型一抗及其來源詳細信息如下表(表1)。EnVision 免疫組化試劑盒和 DAB 酶底物顯色液均購自福州邁新生物技術有限科技公司。PBS 代替一抗作為陰性對照。

表1 一抗及其來源

1.3 染色結果判定

β-catenin正常表達于細胞膜，以細胞膜出現黃色或棕黃色染色為陽性細胞；β-catenin異常表達于細胞質和核，以細胞質和核出現黃色或棕黃色染色為陽性細胞。E-cadherin和P120 表達于細胞膜或質，以細胞膜或質出現黃色或棕黃色染色為陽性細胞。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 β-catenin在正常乳腺組織和IDC中的表達

在全部32例IDC、11例ILC和8例混合型癌的癌旁和腫瘤中殘存的正常乳腺組織中，β-catenin在上皮細胞膜上呈連續的強陽性表達，陽性率100.0%。在32例IDC中，20例β-catenin呈細胞膜強陽性表達(圖1A)，陽性率62.5%，12例表現為細胞質和細胞核棕黃色著色的異常表達，陽性率37.5%(圖1B)；在8例混合型癌的IDC成分中，4例β-catenin呈細胞膜強陽性表達，陽性率50.0%；4例表現為細胞質/核的異常表達，陽性率50.0%。β-catenin在IDC和混合型癌IDC組織中的表達情況比較，差異無統計學意義(P>0.05)(表2)。

注：A:β-catenin在IDC中呈細胞膜強陽性表達；B:β-catenin在IDC中部分病例表現為細胞質和細胞核棕黃色著色的異常表達

表2 β-catenin在IDC和混合型癌IDC組織的表達情況比較[n(%)]

2.2 β-catenin在ILC中的表達

用免疫組化檢測法觀察了11例ILC和8例混合型癌的ILC成分中β-catenin的表達，發現11例ILC β-catenin全部表達陰性，即表達缺失，陰性率100.0%；而在混合型癌的ILC部分，與IDC和正常乳腺導管上皮相比，β-catenin表達明顯缺失，陰性率100.0%。β-catenin在ILC和混合型癌ILC組織中的表達情況比較，差異無統計學意義(2=0.000，P=1.000)。但β-catenin在IDC和ILC組織中表達情況比較，差異有統計學意義(P<0.05)(圖2、表3)。

注：A:在ILC中 β-catenin全部表達陰性:B:混合型病例的ILC成分β-catenin表達缺失，箭頭所示為正常導管上皮細胞表達為細胞膜的強陽性

表3 β-catenin在IDC和ILC組織的表達情況比較[n(%)]

2.3 β-catenin與E-cadherin和P120表達的相關性

51例乳腺癌癌旁和殘存的正常乳腺組織上皮細胞中，E-cadherin和P120均為連續的細胞膜染色強陽性，陽性率100.0%；在32例IDC和8例混合型癌的IDC成分中，E-cadherin和P120均為連續的細胞膜染色強陽性，陽性率100.0%。兩者與β-catenin的陽性表達程度呈正相關(r=0.832，P<0.001)。而在11例ILC和8混合型癌的ILC部分中，E-cadherin表達均表現為不同程度的減弱，甚至缺失，與β-catenin的缺失表達程度呈正相關(r=0.727，P<0.001)；然而，與在IDC和正常乳腺上皮細胞的細胞膜表達模式不同，P120在這些ILC及混合型癌病例中均表現為細胞質棕黃色著色， 而β-catenin表達缺失，兩者的表達情況比較，差異有統計學意義(P<0.05)(圖3、表4)。

注：A、B:在IDC中E-cadherin(A)和P120(B)均為連續的細胞膜染色強陽性表達模式； C :在混合型病例中β-catenin表達部分缺失，附同一病變區域內E-cadherin表達下調，表現為包膜的不連續著色或者表達缺失；D：ILC中P120表達模式為細胞質棕黃色著色

表4 不同蛋白在ILC和混合型癌ILC組織的表達情況比較[n(%)]

3 討論

ILC是第二常見的乳腺腫瘤，主要表現為腫瘤細胞失黏附，呈印度列兵樣或圍繞導管靶環狀排列生長，缺乏明顯管腔形成。然而乳腺癌是一個異質性腫瘤，同種類型甚至同一病例的乳腺癌組織形態也會有較大差異，臨床工作中經?？捎龅骄哂行∪~特征的IDC，組織結構、細胞形態和激素表達譜都具有高度相似性，此類IDC往往腫瘤細胞體積稍大，可形成小的巢團，但仍可表現為失黏附性的細胞形態，腫瘤細胞呈印度列兵樣或者靶環樣排列，與經典的ILC難以區分。盡管兩者都可表達ER，對內分泌治療敏感，但ILC常為多中心性，判斷切緣時ILC及混合型癌的標準比非特殊類型的IDC更要嚴格。此外，ILC更傾向于肺、骨、胃腸道、子宮、卵巢及腦膜的轉移[2]，因此準確的鑒別IDC和ILC對于治療選擇和預后評估具有至關重要的價值。目前較公認的是根據E-cadherin和P120的表達模式區分IDC和ILC[5]，在IDC中E-cadherin和P120均表現為連續的細胞膜著色，而在ILC中E-cadherin常常表達下調或缺失，P120則表現為細胞質著色。然而在實際工作中，E-cadherin的表達強弱有時很難判斷，且P120細胞質和細胞膜著色也常因人工問題很難區別，因此急需找到一個新的標記物輔助臨床診斷。

β-catenin是1989年被Nagafuchi等首先報道的，其基因CTNNB1 位于人染色體 3p21，長23.2 kb，包含16個外顯子，編碼蛋白大小92 KD[6]。β-catenin是經典Wnt信號通路中重要的轉錄激活因子，在胚胎發育、器官形成和腫瘤發生中均發揮重要的作用[7]。當Wnt通路激活時，糖原合成酶激酶-3β發生失活，β-catenin不能被降解并進入細胞核，與轉錄因子相互作用啟動轉錄過程，調控相應基因的表達并進一步導致腫瘤的發生。同時，β-catenin是一類非常重要的黏附因子，可協助E-cadherin和α-catenin蛋白連接，維持組織結構的完整性和極性[7]。本研究結果顯示，在正常乳腺組織中，β-catenin定位于細胞膜并呈彌漫性的線性強陽性表達，而在IDC中，盡管全部病例都表現為β-catenin陽性，但37.5%的病例表現為細胞質和核的異常表達，表明Wnt通路可能參與了乳腺癌的發生發展。與正常乳腺組織和IDC不同，11例ILC標本和8例混合性癌中的ILC成分中β-catenin全部表達陰性，同時E-cadherin表達缺失伴P120細胞質表達，與既往研究[5]結果一致的，這可能是由于E-cadherin基因突變或者甲基化導致表達下降從而失去與β-catenin的連接造成的，具體分子機制需要進一步的深入研究。

綜上所述，β-catenin是Wnt信號通路的重要組成部分，并與E-cadherin共同作用維持正常細胞的黏附性。ILC中β-catenin表達缺失有利于與IDC鑒別，是輔助E-cadherin和P120診斷的重要標記物，對乳腺癌的分類和治療方法的選擇及預后評估均具有顯著意義。