腦卒中患者MTGFR及MTRR基因多態性與Hcy水平的相關性分析

徐紅強 王艷玲 王 銳

新鄉市第一人民醫院 新鄉醫學院第五臨床學院，河南 新鄉 453000

腦卒中是腦血管突發破裂或阻塞引起的腦組織損傷，具有很高的致殘率和致死率[1-2]。腦卒中發生與發展受遺傳基因、高血壓、高血脂等多種危險因素的影響，其中高同型半胱氨酸(Hcy)血癥為腦卒中的獨立危險因素。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTGFR)、蛋氨酸合成酶還原酶(MTRR)能夠介導葉酸代謝過程，MTGFR基因677和1298位、MTRR基因66位是最常見的突變位點[3]。研究發現，MTGFR及MTRR基因不同位點突變均會提升血清Hcy水平，但上述基因突變是否與腦卒中發生有關仍未完全闡明。亦有研究顯示，不同地區、不同民族的MTGFR基因677和1298位點基因型分布存在差異[4]。本研究分析新鄉市第一人民醫院神經內科收治的腦卒中患者MTGFR及MTRR基因多態性特點及與血清Hcy水平的關系，旨在為本地區腦卒中患者的防治提供參考。

1 對象與方法

1．1研究對象選取2018-03—2019-06新鄉市第一人民醫院神經內科收治的腦卒中患者184例為腦卒中組。入選標準：符合中華醫學會2016年頒布的中國腦血管診治指南與共識中的腦卒中診斷標準，并經影像學檢查確診。排除標準：合并血液系統疾病、動脈瘤、惡性腫瘤的患者。其中男98例，女86例；年齡52～80(64.28±9.41)歲；腦卒中病程<7 d，合并高血壓144例，糖尿病76例，高脂血癥94例。收集同期體檢的健康志愿者280例為對照組，男151例，女129例；年齡50～76(63.51±8.63)歲。2組患者性別、年齡間差異無統計學意義(P>0.05)。具有可比性。

1．2方法

1．2．1 MTGFR及MTRR基因多態性檢測：采集2組口腔黏膜上皮脫落細胞，使用DNA提取試劑盒(吸附柱法)提取基因組DNA，試劑盒購于上海伯易生物科技有限公司。PCR反應體系共10 μL：濃度為20 ng/μL的基因組DNA 1 μL，ABI TaqMan Universal 預混液5 μL，0.5 μL MGB探針，3.5 μL去離子水。反應條件：95 ℃ 10 min，92 ℃ 20 s，60 ℃ 2 min，共40個循環。使用QuantStudioTMDx實時熒光定量PCR儀讀取PCR擴增產物的終點熒光，通過系統自帶的軟件進行SNP分型，包括：MTGFR基因677位點的野生型(CC)、突變型(TT)、雜合型(CT)；MTGFR基因1298位點的野生型(AA)、突變型(CC)、雜合型(AC)；MTRR基因66位點的野生型(AA)、突變型(GG)、雜合型(AG)。

1．2．2 血清Hcy水平檢測：抽取2組空腹外周靜脈血3 mL，1 h內上離心機，3 000 r/min離心10 min，收集血清，酶聯免疫吸附法測定血清Hcy水平，試劑盒購于上海仁捷生物科技有限公司，操作嚴格按說明書進行。當Hcy>15 μmol/L時為高同型半胱氨酸血癥。

2 結果

2．1 2組患者MTGFR基因677位點多態性分析腦卒中組與對照組MTGFR基因677位點等位基因分布情況間差異有統計學意義(P<0.05)，腦卒中組TT型比例明顯上升，CC型比例明顯下降。腦卒中組等位基因T的頻率明顯高于對照組，差異無統計學意義(P<0.05)。見表1。

2．2 2組患者MTGFR基因1298位點多態性分析腦卒中組與對照組MTGFR基因1298位點等位基因分布情況間差異無統計學意義(P>0.05)；等位基因頻率在腦卒中組與對照組間差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2．3 2組患者MTRR基因66位點多態性分析腦卒中組與對照組MTRR基因66位點等位基因分布情況間差異有統計學意義(P<0.05)，腦卒中組GG型比例明顯上升，AG型比例明顯下降。等位基因頻率在腦卒中組與對照組間差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

2．4 MTGFR及MTRR各位點不同基因型患者血清Hcy水平比較MTGFR基因677位點基因型CC、TT、CT患者的血清Hcy水平間差異有統計學意義(P<0.01)，其中基因型TT患者的Hcy水平明顯高于CC型和CT型患者。MTRR基因66位點基因型AA、AG、GG患者的血清Hcy水平間差異有統計學意義(P<0.05)，其中基因型GG患者的Hcy水平明顯高于AA型和AG型患者。MTGFR基因1298位點不同基因型患者的血清Hcy水平間差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表1 2組患者MTGFR基因677位點多態性分析 [n(%)]Table 1 Polymorphism analysis of MTGFR gene locus 677 in the two groups [n(%)]

表2 2組患者MTGFR基因1298位點多態性分析 [n(%)]Table 2 Polymorphism analysis of MTGFR gene 1298 in the two groups [n(%)]

表3 2組患者MTRR基因66位點多態性分析 [n(%)]Table 3 Polymorphism analysis of MTRR gene 66 in the two groups [n(%)]

表4 MTGFR及MTRR各位點不同基因型患者血清 Hcy水平比較Table 4 Comparison of serum Hcy levels in MTGFR and MTRR patients with different

3 討論

人類編碼MTGFR基因定位于染色體1p36.3，存在多種突變類型，能夠降低酶的活性[5-8]。MTGFR基因的主要功能是將5，10-亞甲基四氫葉酸轉化為有活性的5甲基四氫葉酸，當發生基因突變時會造成Hcy復甲基化障礙，提升血清Hcy濃度，引發多種疾病[9-10]。MTGFR基因多態性與腦卒中的相關性是目前研究熱點之一，但已有研究報道的結論存在差異。部分研究認為，MTGFR基因在腦卒中發生、發展中具有重要作用[11-13]；但有研究顯示，MTGFR基因突變與腦卒中的發生無明顯關聯[14-19]。本研究顯示，腦卒中組MTGFR基因677位點的TT基因型比例明顯高于對照組，CC基因型比例明顯低于對照組，且等位基因T的頻率明顯高于對照組。提示MTGFR基因677位點基因突變會提升腦卒中的發生風險，其中主要表現為等位基因T頻率升高。腦卒中患者MTGFR基因677位點的TT基因型的血清Hcy水平明顯高于CC基因型和CT基因型，提示MTGFR基因677位點基因突變能夠降低亞甲基四氫葉酸還原酶活性，提升血清Hcy水平，且為腦卒中發生的危險因素。但MTGFR基因 1298位點的各基因型與腦卒中及血清Hcy水平之間無明顯關聯。

MTRR能夠催化無活性的蛋氨酸合成酶轉化為有活性的酶，在蛋氨酸代謝中發揮重要作用[20-23]。MTRR基因突變是導致酶活性降低或喪失的主要原因，以66位點突變最為常見，會提升血漿Hcy水平[24-26]。本研究顯示，腦卒中組MTRR基因66位點的GG基因型比例明顯高于對照組，AG基因型比例明顯低于對照組，提示MTRR基因66位點GG基因型會提升腦卒中的發生風險。同時MTRR基因66位點GG基因型患者的Hcy水平明顯高于AA基因型和AG基因型患者，說明MTRR基因66位點突變能夠提升血清Hcy水平。相關研究顯示，外周血Hcy水平升高會影響凝血系統，促進血小板活化，是缺血性腦卒中發病的獨立危險因素[27-28]。結合本研究結論可推測MTRR基因66位點基因突變以及MTGFR基因677位點基因突變能夠通過提升外周血Hcy水平促進腦卒中的發生與發展。但考慮到本研究樣本量較少，可能存在實驗偏差，今后研究中仍需進一步擴大樣本量來明確MTGFR基因和MTRR基因與高Hcy水平和腦卒中的關系。