索拉非尼聯合卡培他濱治療肝細胞肝癌療效及對患者血清miR-212和miR-132水平的影響

曹紹華，王慶慶，張金冉

延安大學附屬醫院臨床藥學科（延安716000）

肝癌病死率居惡性腫瘤前五位，其中肝細胞肝癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）約占90%，具有高復發傾向，目前暫無有效方法能將其阻斷，因外科切除手術適應證多、復發率高，射頻消融、化療等手段在臨床上應用的越來越廣泛［1-3］。索拉非尼通過抑制絲／蘇氨酸激酶及上游受體的產生，抑制腫瘤增殖和新血管的生成，對中晚期HCC 患者療效顯著［4］。但是，索拉非尼的高劑量使用給患者帶來嚴重的不良反應，在臨床治療中會聯合其它抗腫瘤藥物進一步發揮其優勢［5］。本研究討論了索拉非尼聯合卡培他濱治療HCC 的療效及對患者血清微小RNA（miR）-212 和miR-132水平的影響，現報告如下。

資料與方法

1 一般資料 選取2017年1月至2019年1月本院收治的70 例HCC 患者，隨機數字表法分為兩組，試驗組35例，男性23例，女性12例，年齡40～76歲，平均（56.94±5.23）歲；TNM 分期:Ⅲb期7例、Ⅳ期28例；體力狀況（ECOG）評分（2.14±0.14）分。對照組35例，男性21例，女性14例，年齡39～75歲，平均（57.32±5.68）歲；TNM 分期:Ⅲb期10例、Ⅳ期25例；ECOG 評分（2.17±0.15）分。兩組患者一般資料比較無統計學差異（P＞0.05）。病例納入標準:①經細胞學及組織學病理確診為HCC 患者；②TNM 分期:Ⅲb、Ⅳ期；③無外科手術、肝動脈化療栓塞術等介入治療指征；④病灶可測量，預計生存期＞3個月；⑤經醫院倫理委員會審批，患者自愿參與本研究。排除標準:①患有其他惡性腫瘤者；②合并嚴重感染及出血者；③合并血液系統疾病或傳染病等；④合并嚴重心腦血管疾病者；⑤伴隨肺間質疾病或嚴重肝腎功能障礙者。

2 治療方法 兩組患者均在治療過程中進行抑酸、保肝和抗感染等常規處理。對照組:口服索拉非尼（多吉美，注冊證號20060296），200 mg／d，分兩次服用，21 d為1個療程，持續口服2個療程。試驗組:在對照組基礎上口服卡培他濱（國藥準字H20133365）1500 mg／（m2·d），連續口服14 d，停藥7 d，21 d為1個療程，化療2個療程。治療結束進行影像學檢查，并對治療效果進行評估。

3 評價標準 ①兩組臨床療效。化療前和化療結束后兩周，進行CT 檢查，按照RECIST 實體瘤療效評價標準［6］，完全緩解（CR）:可見病灶消失，至少持續4周以上掃描無異常；部分緩解（PR）:腫瘤最大直徑和最大垂直直徑的乘積減小≥50%；疾病穩定（SD）:腫瘤最大直徑和最大垂直直徑的乘積減小＜50%，增大＜25%；疾病進展（PD）:一個或多個病灶的腫瘤最大直徑和最大垂直直徑的乘積增大≥25%。疾病控制率=（CR+PR+SD）／總例數×100%。②兩組白細胞介素-2（IL-2）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、干擾素-γ（INF-γ）水平對比。采集化療前后患者靜脈血5 ml，在3000 r／min離心10 min分離血清，-20℃保存待查，利用酶聯免疫法（ELISA）檢測血清中IL-2、TNFα、INF-γ濃度，試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供。③兩組血清miR-212和miR-132水平對比。血漿總RNA 的提取:標本解凍后進行兩相分離，通常RNA 分布于上層無色水相中；取上層液進行RNA 沉淀，管底出現白色沉淀，將獲得的白色沉淀進行洗滌和溶解，DU800型分光光度計測定RNA 的濃度及純度；隨即進行逆轉錄反應，將獲得的逆轉錄產物保存于-20℃的冰箱中。實時定量熒光聚合酶鏈反應（Realtime qPCR）技術檢測miR-212／132 水平，Real-time qPCR 引物合成由英濰捷基（上海）貿易有限公司提供，PCR 引 物 序 列miR-212／132 分 別 為:5'-GCCGATAACAGT CTACAGC-3'和5'-CAGTGCAG GGTCCGAGG-3'；5'-GCCGATAACAGTCTACAG C-3'和5'-CAGTGCAGGGTCCGAGG-3'；內參照基因為U6 RNA，U6定量引物:5'-GTGCGTGTCGTGGAGTCG-3'和5 AACGCTTCACGAATTTGCG T-3'。嚴格按照Access RT-PCR System 試劑盒說明書進行操作。由SDS 軟件計算每個樣品和內參的Ct值，△Ct=Ct目標基因-Ct內參基因，受試者miRNA 的相對表達水平=2-△△Ct。④兩組不良反應發生情況。根據通用毒性標準（CTC）將不良反應分為0～Ⅳ級，不良反應包括高血壓、手足綜合征、蛋白尿、肝腎功能異常和消化道出血。⑤兩組預后情況比較。對兩組患者通過門診和電話隨訪1年，統計其1年生存率。

4 統計學方法 采用SPSS 22.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用［例（%）］表示，采用χ2檢驗，計量資料采用（±s）表示，采用t檢驗，采用Kaplan-Meier法分析生存率，P＜0.05提示差異有統計學意義。

結 果

1 兩組近期療效比較 化療結束后，試驗組疾病控制率為82.86%高于對照組的60.00%（P＜0.05），見表1。

表1 兩組近期療效比較［例（%）］

2 兩組血清IL-2、TNF-α、INF-γ水平對比 兩組治 療 后IL-2、TNF-α、INF-γ 均 高 于 治 療 前（P＜0.05），治療后試驗組的TNF-α水平低于對照組（P＜0.05），見表2。

3 兩組血清miR-212和miR-132水平對比 兩組治療后miR-212、miR-132水平均高于治療前（P＜0.05），治療后實驗組的miR-212、miR-132 水平均高于對照組（P＜0.05），見表3。

表2 兩組IL-2、TNF-α、INF-γ水平對比（±s）

表2 兩組IL-2、TNF-α、INF-γ水平對比（±s）

注:與治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療后比較，△P＜0.05

組 別 n 時 段 IL-2（ng／L） TNF-α（U／ml）INF-γ（U／ml）試驗組 35 治療前3.55±0.52 42.14±5.23 14.37±2.12治療后 6.14±0.83* 55.78±5.14*△23.04±3.17*對照組 35 治療前 3.71±0.47 42.33±5.26 14.36±2.14治療后 6.28±1.03* 59.03±5.27* 24.19±3.12*

表3 兩組血清miR-212和miR-132水平對比（±s）

表3 兩組血清miR-212和miR-132水平對比（±s）

注:與治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療后比較，△P＜0.05

組 別 n 時 段miR-212 miR-132試驗組 35 治療前0.45±0.11 0.37±0.11治療后 1.03±0.16*△ 0.82±0.17*△對照組 35 治療前 0.44±0.12 0.36±0.11治療后 0.82±0.13* 0.64±0.14*

4 兩組不良反應發生情況對比 試驗組患者手足綜合征和惡心嘔吐的發生率高于對照組（P＜0.05）；兩組疲乏、貧血和白細胞下降的發生率相比無統計學差異（P＞0.05），見表4。

表4 兩組不良反應發生情況對比［例（%）］

5 兩組預后情況比較 試驗組1 年生存率為74.29%（26／35）高于對照組51.43%（18／35），兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05），見圖1。

圖1 兩組HCC患者1年生存曲線

討 論

索拉非尼自2005年批準上市以來，在HCC 及其它惡性腫瘤的治療中都取得了不錯的進展，多項研究證實索拉非尼作為一種絲／蘇氨酸Raf-1激酶抑制劑，可有效延長惡性腫瘤患者生存時間，延緩腫瘤進展時間，為晚期不能進行手術治療的HCC患者提供了生存希望［7］。高劑量索拉非尼的應用會使患者出現較多不良反應，因此索拉非尼聯合用藥方式也是研究熱點之一，Trevisani等［8］的研究指出卡培他濱經腫瘤組織轉化為5-氟尿嘧啶，可與索拉非尼協同治療惡性腫瘤。

本研究中，試驗組疾病控制率為82.86%高于對照組60.00%，說明索拉非尼聯合卡培他濱的化療效果優于索拉非尼單藥。mi-RNA 是一類非編碼單鏈小分子，參與多種疾病過程，同時調控細胞分化、免疫應答等多種過程，存在于易提取的外周血循環系統中，在疾病的無創診斷、評估患者預后的應用中有很大潛力；miR-212／132屬同一基因簇，序列類似，在肝硬化、肝癌患者體內表達均呈降低狀態［9-10］。有研究指出，miR-212／132在肝癌中發揮抑癌基因作用，對肝癌的增殖、轉移有抑制作用，與腫瘤分化程度呈正相關［11-12］。除此之外，通過檢驗兩組患者血清miR-212／132水平，發現治療后試驗組的miR-212、miR-132 水平均高于對照組，說明兩種藥物聯用可以進一步提升miR-212／132水平。

化療對身體的免疫系統有一定傷害，本研究中，兩組治療后IL-2、TNF-α、INF-γ均高于治療前，治療后試驗組的TNF-α水平低于對照組，說明兩者聯用對患者的免疫系統影響更多，提示臨床上應同時采取恢復治療，避免晚期HCC 患者化療后出現肝腎功能衰竭、免疫抑制等嚴重毒副反應。畢麗華等［13］的研究中指出，替吉奧、紫杉醇分別聯合索拉非尼治療肝癌患者，發現兩組不良反應差別不大。石潔瓊等［14］分析了半量或全量索拉非尼聯合卡培他濱治療HCC的療效，發現兩組患者疾病控制情況相當，減少索拉非尼用量會降低患者出現手足綜合征、高血壓的情況。本研究中，試驗組患者手足綜合征和惡心嘔吐的發生率高于對照組；兩組疲乏、貧血和白細胞下降的發生率相比無統計學差異，大多數出現不良反應的患者均為Ⅰ-Ⅱ度，說明大部分患者對于化療劑量是可以耐受的，聯合用藥的不良反應更多。既往研究指出，卡培他濱具有成為結直腸癌一線化療藥物的潛力，而索拉非尼對HCC患者預后提升效果確切［14-16］。試驗組1年生存率高于對照組，證明聯合用藥可更好的控制HCC 進展，提升患者短期生存率。

綜上所述，與索拉非尼單藥化療相比，聯合卡培他濱可提高HCC疾病控制率，同時提升患者血清miR-212和miR-132水平，一定程度上改善預后。