大鼠皮膚挫傷后Beclin1、LC3的表達及其與損傷時間的關系

顏峰平，葉 星，陳圓圓

(贛南醫學院法醫學系，江西 贛州 341000)

法醫學損傷時間是指人體組織、器官損傷后至檢驗時所經歷的時間間隔，損傷時間推斷是法醫病理學研究和實踐的重點與難點內容。客觀、準確的損傷時間推斷能為劃分嫌疑人范圍、推測嫌疑人的作案意圖、現場重建等提供重要依據，具有重要的法醫學意義[1]。現有研究認為通過檢測損傷修復過程中各種生物學指標的變化趨勢，并結合損傷的形態學變化，可以為損傷時間推斷提供良好依據[2]。

細胞自噬參與皮膚損傷的修復過程已被研究證實。本研究通過建立大鼠皮膚挫傷模型，研究不同損傷時間段后自噬相關分子Beclin1、LC3的mRNA及蛋白表達情況，并探討Beclin1、LC3在法醫學損傷時間推斷中的價值。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠42只，體重180～200 g，購自上海杰思捷實驗動物有限公司。

1.1.2主要試劑及儀器5%水合氯醛(Sigma)，TRIzol試劑(Invitrogen)，RIPA裂解液(碧云天生物技術公司)，LC3抗體(CST)，Beclin1抗體(CST)，β-actin抗體(CST)，HRP標記的二抗(CST)，SYBR Green PCR試劑盒(Qiagen)，PCR引物(上海生工生物工程股份有限公司)，熒光定量PCR儀(Applied Biosystems)，蛋白免疫印跡化學發光儀(天能)，核酸電泳儀(天能)等。

1.2實驗方法

1.2.1動物分組和模型建立SD大鼠隨機分為正常對照組，皮膚挫傷后3 h、6 h、12 h、24 h、72 h組及死后皮膚挫傷組，每組6只，參考劉寧國等報道的方法構建大鼠皮膚挫傷模型[3]。在特定損傷時間后將大鼠頸椎脫臼處死，快速提取挫傷區皮膚組織置于-80℃冰箱凍存備用。正常對照組皮膚不作挫傷處理，取與挫傷組相同部位皮膚組織。……