靶向沉默c-Met基因對膀胱癌T24細胞放射敏感性的影響及其機制研究

李建偉 田文靜 劉 民

(滄州市中心醫(yī)院泌尿外二科，滄州 061001)

膀胱癌又稱膀胱尿路上皮癌，是發(fā)生在膀胱黏膜上常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，也是全球第九大常見腫瘤[1]。目前治療膀胱癌的主要方式是手術聯(lián)合放射治療，但由于膀胱癌患者對放療不敏感導致患者預后不良[2]。因此，有效提高膀胱癌患者的放射敏感性變得十分迫切。c-Met是肝細胞生長因子受體，在多數(shù)惡性腫瘤中呈高表達[3-5]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，c-Met的高表達與腫瘤患者預后不良密切相關[6]。目前，c-Met在調控腫瘤細胞放射敏感性的研究備受人們關注[7,8]。近期研究發(fā)現(xiàn)，c-Met在膀胱癌組織亦呈高表達，可能與膀胱癌的臨床分期、病理分級及淋巴結轉移有關[9]。但c-Met是否參與膀胱癌患者放射敏感性的研究目前尚未見報道。因此本實驗通過小干擾RNA技術靶向沉默c-Met基因表達，旨在觀察c-Met siRNA對膀胱癌T24細胞放射敏感性的影響，并探討其作用機制，以期為膀胱癌的放射治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 人膀胱癌T24細胞(武漢大學中國典型培養(yǎng)物保藏中心)；RPIM1640培養(yǎng)基、胎牛血清(美國HyClone公司)；噻唑藍(Methylthiazolyl-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)試劑(美國Invitrogen公司)；胰蛋白酶(杭州四季青生物工程材料有限公司)；Trizol試劑、Lipofectamine 2000轉染試劑(美國Invitrogen公司)；特異性c-Met siRNA1、c-Met siRNA2及非特異性c-Met siRNA(上海吉瑪制藥技術有限公司)；Cleaved Caspase-3抗體、Bax抗體、PI3K抗體和p-AKT抗體及二抗(美國CST公司)；逆轉錄試劑盒(北京康為試劑有限公司)；SYBR premix Ex Taq PCR Kit熒光定量PCR檢測試劑盒(日本TaKaRa公司)；細胞裂解液、BCA蛋白濃度檢測試劑盒(上海碧云天生物技術研究所)；Annexin-Ⅴ/PI細胞凋亡檢測試劑盒(美國BD公司)。……