細菌脂多糖通過MAPK/ERK1/2信號通路影響成骨細胞活性和凋亡

孫 勃 劉士波 王 培 薛鑫鑫 高云峰 付世杰

(承德醫學院附屬醫院手足外科，承德 067000)

近年來，骨質疏松和骨折患者的發病率不斷升高，骨愈合需要比較長的周期，因此促進骨愈合對于骨質疏松和骨折患者的治療具有重要意義。由感染所致的內毒素血癥以及創傷引起的骨感染均可造成骨壞死，感染性骨壞死是骨科領域研究的難點和熱點問題。但感染性骨壞死的機制尚不十分清楚，因此探討骨壞死的機制對早期預防和治療骨壞死具有重要意義。細菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是革蘭氏陰性菌主要的致病成分，可引起組織細胞的功能紊亂，研究發現LPS可影響成骨細胞的增殖、分化和凋亡，延遲骨愈合[1，2]。MAPK/ERK1/2信號通路在成骨細胞的增殖、分化和凋亡中發揮重要作用，通過調控MAPK/ERK1/2信號通路可促進成骨細胞增殖和分化，抑制成骨細胞凋亡[3-5]。本文通過研究LPS對成骨細胞活性和凋亡以及MAPK/ERK1/2信號通路的影響，探討LPS是否通過MAPK/ERK1/2信號通路影響成骨細胞活性和凋亡。

1 材料與方法

1.1材料 小鼠前體成骨細胞株MC3T3-E1(美國ATCC公司)，LPS、Hochest 33258(美國Sigma公司)，DEME/F12培養基、胎牛血清(美國Hyclone公司)，ERK1/2激酶抑制劑U0126(德國Merck公司)，噻唑藍(MTT)、Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒、堿性磷酸酶(ALP)和骨鈣素(BGP)活性測定試劑盒(美國invitrogen公司)，兔抗鼠C-Caspase 3單克隆抗體、兔抗鼠Bcl-2單克隆抗體、兔抗鼠Bax單克隆抗體、兔抗鼠ERK1/2單克隆抗體、兔抗鼠p-ERK1/2單克隆抗體、辣根過氧化物酶標記的羊抗兔二抗等(美國Gibco公司)等。

1.2方法

1.2.1細胞培養 將MC3T3-E1細胞接種到DEME/F12培養基(含10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素)的96孔板中培養，3 d進行1次換液，細胞生長至80%以上融合時進行傳代培養(傳代比例1∶2)?！?br>