針刺結(jié)合水療對腦卒中后肌痙攣大鼠Gly表達(dá)水平的影響

馮麗娟 李夢曉

（1 成都中醫(yī)藥大學(xué) 四川 成都 610075）

（2 四川護(hù)理職業(yè)學(xué)院 四川 成都 610100）

肌肉痙攣和靈活性喪失是影響中風(fēng)存活患者的最常見的并發(fā)癥之一，卒中后肢體痙攣的患病率約為60%，甚至更高[1]。針刺療法是傳統(tǒng)中醫(yī)治療緩解腦卒中后偏癱痙攣的重要方法，簡單、無副作用[2]。水中運(yùn)動療法（水療）是運(yùn)動治療方法之一，可一定程度恢復(fù)損傷后靈活性[3]。我們推測針刺結(jié)合水療可能對腦卒中后痙攣性癱瘓有更好的治療效果。抑制性神經(jīng)遞質(zhì)甘氨酸（Gly）的降低是中樞神經(jīng)受損后并發(fā)痙攣的原因之一[4]。本研究采用針刺申脈、照海，再結(jié)合水療，進(jìn)行腦卒中后痙攣性癱瘓大鼠神經(jīng)功能缺損、肌張力評分及檢測患側(cè)腦組織中Gly含量，研究聯(lián)合治療對腦卒中后肌痙攣大鼠作用。

1.資料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 清潔級健康成年SD大鼠50只，雌雄各半，270-300g，購于成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。

1.1.2 試劑 大鼠甘氨酸（Gly）ELISA試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 50只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為空白對照組、假手術(shù)組、模型組、針刺組和針刺結(jié)合水療組，每組10只。

1.2.2 動物造模及評價 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室改良Zea Longa線栓法制作大鼠MCAO模型[5]。造模完成2h后，以Zea longa 5分制評定神經(jīng)功能缺損狀況：0分為無神經(jīng)功能損傷癥狀，1分為不能伸展對側(cè)前爪，2分為向外側(cè)轉(zhuǎn)圈，3分為向?qū)?cè)傾倒，4分為意識喪失。采用改良Ashworth評分標(biāo)準(zhǔn)評估肌張力：0級為無肌張力增高，大鼠活動自如，1級為輕度肌張力增高，在屈伸過程中出現(xiàn)一過性停頓，2級為明顯肌張力增高，但肢體尚易屈伸，有輕度共濟(jì)失調(diào)，3級為明顯肌張力增高，被動活動困難，有中度共濟(jì)失調(diào)，4級為肢體屈伸受限，有重度共濟(jì)失調(diào)。將Zea longa評分在1～3分、Ashworth評分在1級以上的大鼠納入研究。經(jīng)篩選，模型組、針刺組和針刺結(jié)合水療組各有8只符合標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 治療方法

空白對照組、假手術(shù)組和模型組均正常飼喂，不作處理。針刺組：選擇照海、申脈穴位進(jìn)行針刺治療。于造模第4d開始治療，每天1次，持續(xù)7d。針刺結(jié)合水療組：在針刺組的基礎(chǔ)上，將大鼠放入42℃的溫水中自由活動30min，出浴后用干毛巾為大鼠擦干身體，每天1次，持續(xù)7d。

1.4 行為學(xué)觀察

于造模后的第3d和治療開始后的第7d對所有大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損和肌張力評分，具體評分標(biāo)準(zhǔn)同1.2.2。

1.5 Gly含量檢測

治療結(jié)束后，3ml/kg體重的劑量經(jīng)腹腔注射10%水合氯醛麻醉，然后取右側(cè)半腦，取梗死邊緣組織，勻漿后用于ELISA檢測Gly含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用率（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計量資料采用（±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 針刺結(jié)合水療對神經(jīng)功能的影響

施以 MCAO后，模型組、針刺組和針刺聯(lián)合水療組電針組在治療前則出現(xiàn)了對側(cè)肢體無力、傾倒等癥狀，其神經(jīng)功能評分極顯著高于假手術(shù)組（P＜0.01）。治療后，模型組神經(jīng)功能缺損評分仍高于假手術(shù)組（P＜0.01），與模型組相比，針刺組神經(jīng)功能缺損評分極顯著下降（P＜0.01），相比于針刺組，針刺聯(lián)合水療組神經(jīng)功能缺損評分進(jìn)一步下降（P＜0.05），見表1。

表1 各組卒中大鼠治療前后神經(jīng)功能缺損評分比較（±s）

表1 各組卒中大鼠治療前后神經(jīng)功能缺損評分比較（±s）

注：與假手術(shù)組比較，##P＜0.05；與模型組比較，**P＜0.05；與針刺組比較，▲P＜0.05，下同。

組別 治療前 治療后空白對照組 0 0假手術(shù)組 0 0模型組 2.38±0.74## 2.25±0.71##針刺組 2.00±0.93## 1.38±0.74##**針刺+水療組 2.12±0.83## 0.86±0.64##**▲

2.2 針刺結(jié)合水療對肌肉張力的影響

MCAO后，模型組、針刺組和針刺聯(lián)合水療組在治療前肌張力評分顯著高于假手術(shù)組（P＜0.01）。治療后，與模型組相比，針刺組肌張力評分顯著下降（P＜0.01），與針刺組相比，針刺聯(lián)合水療組肌張力評分顯著降低（P＜0.05），見表2。

表2 各組卒中大鼠治療前后肌張力評分比較（±s）

表2 各組卒中大鼠治療前后肌張力評分比較（±s）

注：與假手術(shù)組相比，##P＜0.01；與模型組相比，**P＜0.01；與針刺組相比，▲P＜0.05。

組別 治療前 治療后空白對照組 0 0假手術(shù)組 0 0模型組 2.10±0.74## 2.38±0.71針刺組 2.13±0.83## 1.25±0.71**針刺+水療組 2.20±0.79## 0.63±0.52#▲

2.3 腦組織Gly含量

模型組Gly含量極顯著低于假手術(shù)組（P＜0.01）；與模型組相比，針刺組以及針刺聯(lián)合水療組Gly含量極顯著升高（P＜0.01）；且針刺聯(lián)合水療組Gly含量顯著高于針刺組（P＜0.05），圖1。

圖 腦組織Gly含量

3.討論

腦卒中偏癱痙攣患者臨床主要表現(xiàn)為神經(jīng)功能缺損和肌群的肌張力增高[6]。本研究中，MCAO模型大鼠出現(xiàn)了神經(jīng)缺損癥狀和肌張力升高，說明造模成功。針刺治療后改善了神經(jīng)缺損癥狀并降低了肌張力，聯(lián)合水療后，上述癥狀進(jìn)一步緩解，說明針刺聯(lián)合水療比單獨(dú)針刺有更好的療效。

痙攣的發(fā)病機(jī)制目前多認(rèn)為是由腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)變化引起中樞易化系統(tǒng)和抑制系統(tǒng)的失衡。Gly屬于抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，可通過與突觸后膜的甘氨酸受體結(jié)合，打開Cl-通道，刺激細(xì)胞外的Cl-跨膜內(nèi)流，對運(yùn)動神經(jīng)元發(fā)揮突觸后抑制效應(yīng)，Gly濃度降低會導(dǎo)致脊髓中樞對α-γ運(yùn)動神經(jīng)元的抑制作用減弱，導(dǎo)致α-γ運(yùn)動神經(jīng)元興奮性增高，肌肉持續(xù)收縮，肌張力增高，從而形成肌痙攣[4]。本研究從Gly釋放的角度，探討了針刺聯(lián)合水療治療腦卒中后肌痙攣的作用機(jī)理。試驗(yàn)結(jié)果表明，肌痙攣程度與Gly含量負(fù)相關(guān)，模型組腦勻漿中Gly濃度極顯著降低，而針刺與針刺聯(lián)合水療均可以使Gly水平回升，針刺聯(lián)合水療組的Gly濃度上升更為明顯，說明針刺聯(lián)合水療能通過升高Gly水平來抑制卒中后的肌痙攣。

綜上，水療可以提高針刺對卒中后肌痙攣的療效，其作用機(jī)理可能與升高Gly水平有關(guān)，Gly的升高使突觸前抑制作用變強(qiáng)，降低α-γ運(yùn)動神經(jīng)元興奮性，減輕痙攣，有助于神經(jīng)功能的恢復(fù)，這可能是針刺聯(lián)合水療改善肌痙攣的機(jī)理之一。