HPLC法測定參茸壯骨丸中升麻素苷的含量

王麗艷，程曉英，李夢瑤

（1.吉林省醫藥中等職業學校，吉林 吉林 132000；2.吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林 132000）

防風是參茸壯骨丸中主藥之一。參茸壯骨丸目前的質量標準是《中華人民共和國衛生部藥品標準》（中藥成方制劑第二十冊），該標準只有其顯微鑒別方法，為了更好地控制參茸壯骨丸的內在質量標準，本文采用了高效液相色譜法[1,2]測定參茸壯骨丸中防風中升麻素苷含量。

1 實驗方法與結果

1.1 實驗材料

LC－2010A高效液相色譜，CLASS－VP色譜工作站；Agilent 8453紫外-可見分光光度計；SartoriusBp211D型電子天平；升麻素苷對照品；參茸壯骨丸；水為超純水；流動相所用甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

色譜柱：Agilent Technologies ZORBA X Extend-C18 4.6×250 mm，5 μm；流動相：甲醇-水（35：65），流速：1.0 ml·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：254 nm。

1.3 溶液制備

1.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取升麻素苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml各60μg·ml-1的溶液，搖勻，備用[3]。

1.3.2 供試品溶液的制備

取5 g樣品，研細，精密稱定，將其放入帶塞錐形瓶中，精密加入甲醇10 mL，稱定重量，水浴回流2小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻濾過，取續濾液，過0.45 μm的微孔濾膜，即得。

1.3.3 陰性樣品溶液的制備

取處方中防風以外的其余藥材適量，按處方制法制成陰性對照物，取陰性對照物適量，同樣品處理方法制得陰性樣品溶液。

1.4 專屬性試驗

取供試品溶液和陰性對照溶液各5 μL，對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明對供試品中的升麻素苷進行測定是可行的。

1.5 線性關系

升麻素苷在22.26～222.60μg·ml-1范圍內峰面積與其濃度呈良好線性關系（r=0.9999）。

1.6 精密度

經檢測，RSD為0.3%，本實驗的精密度良好。

1.7 穩定性試驗

經檢測，RSD為0.5%，表明供試品24h內穩定性較好。

1.8 重復性試驗

取供試品共5份，分別按“1.3.2”方法制備供試品溶液，進行測定，分別精密吸取供試品溶液5 μL，對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，計算求得升麻素苷含量的均值為140.13μg·ml-1，RSD為0.1%，表明重復性較好。

1.9 加樣回收率試驗

制備供試品溶液，分別精密稱取已知含量的樣品（升麻素苷含量140.13μg·g-1）適量，共9份，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入升麻素苷對照品貯備液（60μg·ml-1）適量，按“1.3.2”方法操作，得回收率試驗溶液，依法測定。

1.10 樣品含量測定

在上述試驗基礎上，分別精密吸取依標準方法制備的供試品溶液10 μL和對照品溶液5 μL，分別注入液相色譜儀，測定3批參茸壯骨丸中升麻素苷的峰面積，按外標法計算其含量（n=3），結果見表1。

表1 3批參茸壯骨丸含量測定結果

2 討 論

2.1 流動相的選擇

經多次測定確定流動相為甲醇-水（35：65），分離效果達到要求，對照品的峰形好。

2.2 檢測波長的選擇

在實驗前用紫外分光光度計對升麻素苷對照品和供試品進行掃描，確定波長254 nm為檢測波長。

2.3 結果

參茸壯骨丸升麻素苷的測定結果準確，可將該含量測定方法作為參茸壯骨丸的質量控制標準。

2.4 前景

可提高參茸壯骨丸的質量標準，增加含量測定項，規定升麻素苷應不得少于120 μg·g-1。