人胃內因子在谷氨酸棒桿菌中的表達及活性研究

董貴彬， 潘穎越， 司雅楠， 王新月， 白仲虎， 劉秀霞， 楊艷坤

(糧食發酵工藝與技術國家工程實驗室 工業生物技術教育部重點實驗室 江南大學 生物工程學院， 無錫 214122)

人胃內因子(Gastric intrinsic factor，gif，GIF)是一種由胃黏膜壁細胞產生的糖蛋白(NCBI Reference Sequence: NP_005133.2；GeneID:2694)，具有結合并保證維生素B12有效吸收的功能。有人通過該作用機制提出了一種口服給藥方式，可以保證藥物不被降解且被人體有效吸收[1]。在人體內，GIF的缺乏將直接導致機體無法正常吸收維生素B12，進而引起機體患惡性貧血[2]。Mottram等人通過小鼠模型研究發現GIF缺失會導致機體免疫力下降，易感染腸道沙門氏菌等病菌[3]。GIF由胃黏膜壁細胞產生，存在于人的胃腸道內，與食物中的VB12結合后通過小腸吸收，在維持機體健康中扮演著重要角色，但是目前尚未有關于表達生產人胃內因子的研究報道。

此前，C.glutamicum主要應用于各種氨基酸和醇等小分子的生產[4-5]。研究發現，其在蛋白表達上同樣具有優勢。它不產內毒素，胞外水解酶活性低，能夠產生正確折疊的外源蛋白[6]。目前已有用C.glutamicum表達scFv、EGFP、VHH和淀粉酶等外源蛋白報道[7-9]。C.glutamicum可以作為一種優良的宿主用于各種蛋白的發酵生產[10-11]，尤其是一些對內毒素等嚴格限制的藥用蛋白。本研究擬利用谷氨酸棒桿菌CGMCC1.15647(C.glutamicumCGMCC1.15647)進行藥用蛋白人胃內因子的表達生產。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株與質粒

E.coliDH5α和C．glutamicumCGMCC1.15647由本實驗室保藏。pXMJ19保藏于本實驗室；pUC57-kan由蘇州金唯智有限責任公司提供。

1.1.2 主要試劑與儀器

PrimeSTAR? Max DNA Polymerase，DNA Ligation Kit購自TAKARA公司；Hind III、BamH I購自Thermo公司；DNA凝膠回收、PCR純化和質粒小量提取試劑盒均購自Axygen公司；……