毛云芝菌菌絲體化學(xué)成分在運(yùn)動(dòng)保健中的作用*

呂慧鵬

（東北石油大學(xué)，黑龍江 大慶 163318）

毛云芝菌（Coriolus hirsutus） 又名毛栓菌、毛革蓋菌，屬非褶菌目 （Polyporales） 多孔菌科（Polyporaceae） 云芝屬（Polystictus），多生長于闊葉樹枯死枝或腐木伐樁上[1]。毛云芝是一種藥用真菌，其菌絲體、菌核或子實(shí)體內(nèi)產(chǎn)生蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、生物堿、甾醇、萜類等藥理活性物質(zhì)，如中成藥“云芝肝泰”等就是以毛云芝為主要原料，其主要功效是除風(fēng)保肝、清熱解毒，多用于輔助治療急慢性肝炎，民間也有用于消炎抗菌、清熱活血的[2-3]，可見毛云芝具有很高的藥用保健價(jià)值。毛云芝作為藥用真菌，在生長發(fā)育的代謝活動(dòng)中能在菌絲體、菌核或子實(shí)體內(nèi)產(chǎn)生蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、生物堿、甾醇、萜類等多種具有藥理活性的物質(zhì)，通過研究毛云芝菌絲體的有效成分對人體的運(yùn)動(dòng)保健功效，進(jìn)一步挖掘毛云芝的藥用價(jià)值，探討毛云芝菌絲體物質(zhì)對運(yùn)動(dòng)保健的作用和影響。

1 試驗(yàn)儀器與試劑

主要試驗(yàn)儀器：TYXN-91智能血液凝集儀，上海通用電機(jī)電技術(shù)研究所；7230G型可見分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司；800型低速離心沉淀機(jī)，廈門興萬電子儀器有限公司；BS-224型電子天平，德國SARTORIUS公司；GF-4000型上皿電子天平，上海滬粵明科學(xué)儀器有限公司；HH-1型電熱恒溫水浴鍋，北京科偉永興儀器有限公司。

主要試劑：無水乙醇，甲醇，檸檬酸、磷酸、鄰苯三酚、鹽酸，均為分析純，天津市紅巖化學(xué)試劑廠；甲酰胺，天津縱橫興工貿(mào)公司化工試劑分公司；Evans Blue（埃文斯藍(lán)），上海懋康生物科技有限公司。

2 試驗(yàn)分組及給藥劑量

試驗(yàn)采用18 g～22 g體重的昆明種小鼠40只，雌雄各半，購自江蘇艾菱菲生物科技有限公司。按體重隨機(jī)分成4組，每組10只，即低劑量組、中劑量組、高劑量組和空白對照組（CK）。高劑量組每天每只給小鼠灌胃8 g·100-1g-1體重的樣品溶液；中劑量組每天每只給小鼠灌胃4 g·100-1g-1體重的樣品溶液；低劑量組每天每只給小鼠灌胃2 g·100-1g-1體重的樣品溶液；空白對照組（CK）每天每只給小鼠灌胃等量的蒸餾水。

3 毛云芝菌菌絲體樣品溶液制備

毛云芝菌菌絲體制備：毛云芝菌由西北農(nóng)林科技大學(xué)和中國林業(yè)科學(xué)研究院森林生態(tài)環(huán)境與保護(hù)研究所提供，在馬鈴薯培養(yǎng)基上培養(yǎng)，發(fā)酵生產(chǎn)毛云芝菌菌絲體。收集菌絲體發(fā)酵液進(jìn)行過濾、干燥、過40目篩后得菌絲體粉末，備用。

毛云芝菌菌絲體樣品溶液制備[4]。量取毛云芝菌菌絲體粉末12 g，以70%乙醇為溶劑進(jìn)行有效成分的提取，第1次8倍量提取2 h，第2次6倍量提取1 h，將2次提取所得提取液收集并合并，放入冰箱靜置24 h后過濾，收集濾液濃縮至適宜的體積，即得毛云芝菌菌絲體樣品溶液。

4 毛云芝菌絲體對小鼠毛細(xì)血管通透性的影響

4.1 小鼠毛細(xì)血管通透性試驗(yàn)

每天給5組小鼠灌胃樣品溶液或等體積蒸餾水1次，連續(xù)1周。最后1次灌胃1 h后，將小鼠尾巴拉直繃緊，在尾尖1/3處注射Evans Blue Stain（0.5%） 溶液1 mL·100-1g-1，可見小鼠眼睛皮膚出現(xiàn)藍(lán)色，30 min后剪斷頸動(dòng)脈放血，待小鼠全部血液流盡后解剖取出小鼠臟器，放在過濾紙上將殘留的血液吸盡。用分析天平稱重后放入20 mL甲酰胺溶液中，置于恒溫水浴鍋（55±2）℃水浴24 h，得到的試驗(yàn)用小鼠臟器甲酰胺溶液。

4.1.1 埃文斯藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取埃文斯藍(lán)溶液1 mg，以甲酰胺為溶劑，溶解定容至50 mL，得到濃度為20 μg·mL-1的溶液作為母液。分別精密量取此母液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL于10 mL容量瓶，用甲酰胺定容至刻度，于620 nm處測定吸光度，制作埃文斯藍(lán)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1所示。

由圖 1 可知，在 1.0 μg·mL-1～6.0 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，埃文斯藍(lán)溶液的濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系，得線性回歸方程y=0.115 9x+0.059 2，其相關(guān)系數(shù)R2=0.999 7（n=6）。

4.1.2 血管通透性的測定

將試驗(yàn)用小鼠臟器甲酰胺溶液放入離心機(jī)，在2 000 r·min-1離心15 min后取上清液，用分光光度計(jì)在波長610 nm處測吸光度。并根據(jù)圖1的埃文斯藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算溶液內(nèi)埃文斯藍(lán)濃度，最后以每100 mg小鼠腦組織中所含染色物質(zhì)的微克數(shù)表示，用于測定小鼠的血管通透性。各組埃文斯藍(lán)含量測定結(jié)果如表1所示。

從表1可以看出，高、中、低劑量的埃文斯藍(lán)通透量均有所提高，與對照組相比，高劑量組P＜0.01、中劑量組P＜0.01、低劑量組P＞0.05。因此，與對照組相比，低劑量組不顯著，而中劑量組與高劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性，對小鼠毛細(xì)血管通透性增加均有顯著性影響。

4.2 對小鼠血小板聚集功能的影響

4.2.1 試驗(yàn)分組及給藥劑量

取小鼠40只，按體重隨機(jī)分為4組，每組10只，即對照組、高劑量組、中劑量組和低劑量組。連續(xù)灌胃7 d。最后1次灌胃前將小鼠禁食12 h，最后1次灌胃后1 h進(jìn)行血小板聚集試驗(yàn)[5]。給小鼠肌肉注射濃度為20%的乙酯1 mg·kg-1進(jìn)行麻醉，麻醉后進(jìn)行腹腔取血9 mL，立即加入3.28%的枸櫞酸鈉按抗凝劑1 mL混合均勻，上離心機(jī)1 000 r·min-1離心10 min后，取上層懸濁液進(jìn)行測量。將血小板聚集儀預(yù)熱，調(diào)節(jié)聚集儀恒溫按鈕,使恒溫在37℃。取各組待測血樣進(jìn)行測定。

4.2.2 試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。

表2 各組聚集時(shí)間Tab.2 Aggregation time of each group

由表2可以看出，與對照組相比，各劑量組血小板的凝聚時(shí)間均有所延長：高、中、低三個(gè)劑量組將血小板聚集時(shí)間分別延長了19.50 s、24.18 s和26.60 s，平均延長了23.30 s。與對照組相比，低、中、高劑量組均P＜0.01，因此，與對照組相比，高中低劑量組對大鼠血小板聚集時(shí)間的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異。

5 體外抗氧化性能的測定

為了研究毛云芝菌菌絲體對運(yùn)動(dòng)損傷的作用，采用體外抗氧化性能試驗(yàn)，測定超氧陰離子的清除率，用于檢測毛云芝菌菌絲體的抗氧化功效[6]。具體試驗(yàn)如下。

首先，用毛云芝菌菌絲體樣品粉末配制4 mg·mL-1、8 mg·mL-1、12 mg·mL-1、16 mg·mL-1、20 mg·mL-1、24 mg·mL-1、28 mg·mL-1濃度的樣品溶液，取1.0 mL各濃度的毛云芝菌菌絲體樣品溶液加入0.01 mol磷酸緩沖溶液4.5 mL，調(diào)pH至 8，在25℃水浴鍋中水浴30 min后，再加入45 mmol·L-1的鄰苯三酚溶液0.1 mL，25℃水浴5 min，最后加10 mmol·L-1鹽酸2滴終止反應(yīng)，在420 nm處測定吸光度值。空白組不加鄰苯三酚，對照組為鄰苯三酚自氧化組，即不加樣品測吸光度。清除率（E，%）計(jì)算公式為：

式中：A為樣品吸光度；A0為空白吸光度；A1為對照吸光度。

超氧陰離子的清除試驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。

由圖2可知，隨著毛云芝菌菌絲體樣品溶液濃度的增加，對超氧陰離子的清除效果越來越明顯，當(dāng)濃度達(dá)到28 mg·mL-1時(shí)達(dá)到最高清除率21.24%。說明毛云芝菌菌絲體樣品溶液濃度在試驗(yàn)范圍內(nèi)與超氧陰離子自由基的清除效果成正比。

7 結(jié)論

對小鼠毛細(xì)血管通透性和血小板聚集功能的試驗(yàn)結(jié)果表明，毛云芝菌菌絲體的有效成分對小鼠毛細(xì)血管通透性有明顯的提高，能夠疏通血管、改善臟器血液的微循環(huán)，增加運(yùn)動(dòng)血液供給。而體外抗氧化性能試驗(yàn)也證明，毛云芝菌菌絲體的有效成分對超氧陰離子自由基有很好的清除效果，增強(qiáng)了機(jī)體的運(yùn)動(dòng)抗氧化能力，可以減輕運(yùn)動(dòng)疲勞，加快體能恢復(fù)，具有很好的運(yùn)動(dòng)保健作用。