香菇多糖對外周血肌酸激酶和尿素氮以及骨骼肌抗氧化能力影響

張高杰，覃 圓

（1.周口師范學院體育學院，河南 周口 466001；2.廣西外國語學院體育教學部，廣西 南寧 530000）

預防運動性疲勞，維持機體正常的生理運轉(zhuǎn)，是運動科學領域重要課題。研究證實，大強度運動會造成機體運動性疲勞，體內(nèi)自由基增多，細胞內(nèi)能量運轉(zhuǎn)障礙等，嚴重影響比賽與訓練[1-2]。香菇多糖是香菇中提取的活性成分物質(zhì)，具有抗腫瘤、抑菌消炎、抗氧化、改善腸道功能等多重功效[3-5]。有關香菇多糖在運動醫(yī)學領域的研究較少，以香菇多糖為預防性藥物，觀察香菇多糖預處理對大鼠運動能力、肌酸激酶（CK）、尿素氮（BUN） 及骨骼肌抗氧化能力的影響，為香菇多糖在運動醫(yī)學領域的應用提供試驗基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組

30只成年雄性SD大鼠，購自廣西醫(yī)科大學，體質(zhì)量 （207±15） g。

大鼠自由飲食、進水，大鼠隨機分為3組：安靜組10只（A組），運動組10只（B組），運動低給藥組10只（C組），試驗前，對3組小鼠的體質(zhì)量進行比較，組間無顯著差異。

1.2 主要儀器和主要試劑

大鼠電動跑臺，SA101，江蘇賽昂斯生物科技；轉(zhuǎn)速冷凍機，DL-46RC，中科生物醫(yī)學高科技開發(fā)公司；高速電動勻漿機，F(xiàn)SH-2，中科生物醫(yī)學高科技開發(fā)公司；榮升冰箱（BCD-203A，榮升冰箱有限公司。

香菇多糖為干香菇粉碎，稱重，石油醚脫脂。脫脂香菇90℃水浸提2次（香菇與水比例為1:20），收集濾液。濾液加無水乙醇放置12 h，過濾沉淀。再用80%乙醇洗滌多次，干燥后得香菇多糖粗品，粉狀，測定多糖含量87%。

谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）測試盒、超氧化物歧化酶（SOD） 測試盒、丙二醛（MDA） 測試盒、Na+/K+-ATP試劑盒、Ca2+/Mg2+-ATP試劑盒購自南京建成生物工程研究所等。CK試劑盒、BUN試劑盒購于中生北控生物科技股份有限公司。

1.3 動物訓練方案與給藥方案

A組不運動，正常進食飲水。B組、C組進行為期6周的大強度跑臺訓練，每周6 d，周日休息。前3周為遞增負荷訓練，速度分別為15 m·min-1、15.2 m·min-1、26.8 m·min-1，坡度均為 0、5%、5%，時間均為25 min·d-1；后3周為大強度訓練，速度均為31 m·min-1，坡度均為5%、5%、10%，時間均為30 min，最后1 d訓練至力竭。訓練后期，受訓練強度、灌胃不當?shù)挠绊懀珺組、C組大鼠各有1只死亡。

C 組在每天上午 9∶00～11∶00，灌服劑量為 30mg·kg-1的香菇多糖（劑量根據(jù)前期試驗有效性確定，給藥前，先用蒸餾水將香菇多糖配置為5 mg·mL-1溶液），A組、B組按照同樣的方式給予同體積的蒸餾水。

1.4 動物取材和指標的測定

1.4.1 大鼠外周血CK、BUN的測定

末次訓練后，麻醉，腹腔主動脈血經(jīng)約2.0 mL，靜置 25 min，以 4℃，3 500 r·min-1速度離心 15 min，取上清液，待測肌酸激酶（CK）、尿素氮（BUN） 含量。

1.4.2 骨骼肌組織勻漿的制備

3組大鼠在末次訓練后，65 mg·kg-1戌巴比妥鈉麻醉后斷頭處死。迅速剝離小腿三頭肌，生理鹽水沖洗干凈血漬，濾紙吸干，冰箱保存待測。稱量腦組織5 g，按1∶9加入生理鹽水，低溫離心15 min（4℃，6 000 r·min-1），分離提取上清液，冰箱保存待測[6]。

1.4.3 指標的測定

CK采用速率法測定[7]；BUN采用酶偶連塑速率法測定[7]；骨骼肌組織總蛋白采用考馬斯亮蘭法測定[8]；MDA采用比色法測定[8]；SOD采用黃嘌呤氧化酶法測定[8]；GSH-Px采用化學比色法測定[8]；Na+/K+-ATP、Ca2+/Mg2+-ATP的測定采用定磷法測定[8]。測試過程嚴格按試劑盒說明進行。

1.5 統(tǒng)計學處理

2 試驗結(jié)果

2.1 各組大鼠CK、BUN含量的測定結(jié)果

不同組大鼠的CK、BUN含量的比較情況，見表1。

表1 不同組大鼠的CK、BUN含量的比較（±s）Tab.1 Comparison of the content of CK and BUN in different groups of rats（ ± s）

表1 不同組大鼠的CK、BUN含量的比較（±s）Tab.1 Comparison of the content of CK and BUN in different groups of rats（ ± s）

注：*與A組相比，P＜0.05；**與A組、B組相比，P＜0.05。下同。Note:*Compared with A group,P＜0.05,**compared with A group and B group,P ＜0.05.It’s the same as below.

組別 數(shù)量/只 CK含量/(U·L-1) BUN含量/(mmol·L-1)A 組 10 152.58±12.47 16.77±0.73 B 組 9 263.78±22.13* 45.28±3.08*C 組 9 212.36±21.21** 37.26±2.21**

從表1可以看出，B組、C組CK、BUN含量均高于A組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；C組CK、BUN含量均低于B組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 各組骨骼肌抗氧化的比較結(jié)果

不同組大鼠腦組織的抗氧化測定結(jié)果，具體見表2。

表2 不同組大鼠腦組織抗氧化測定結(jié)果（±s）Tab.2 Anti-oxidation results of rat brain tissues in each group（±s）

表2 不同組大鼠腦組織抗氧化測定結(jié)果（±s）Tab.2 Anti-oxidation results of rat brain tissues in each group（±s）

注：*與A組相比，P＜0.05；**與A組、B組相比，P＜0.05。下同。Note:*Compared with A group,P＜0.05,**compared with A group and B group,P＜0.05.It’s the same as below.

組別MDA含量/(μmol·g-1)GSH-Px活性/(U·mg-1)SOD活性/(U·mg-1）A組數(shù)量/只101.31±0.24 59.84±4.21 78.94±6.61 B組C組9 9 5.78±0.59* 29.23±2.31* 39.46±3.10*3.66±0.46** 47.28±3.91**67.71±5.17**

從表2可以看出，B組、C組MDA含量高于A組，GSH-Px、SOD活性低于A組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；C組MDA含量低于B組，GSH-Px、SOD活性高于B組，差異具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）。

3 討論

測定運動后血中CK含量，間接反映肌細胞對運動的適應。BUN是蛋白質(zhì)分解時產(chǎn)物，常用血中BUN含量判定機體運動負荷大的承受能力。CK、BUN含量上升，原因可能是運動造成細胞膜牽拉、自由基增多等原因，導致肌細胞膜通透性改變，細胞內(nèi)的CK滲出細胞外，造成血內(nèi)CK含量增加。同時，大強度運動促使更多的蛋白質(zhì)分解供能。而服用香菇多糖后CK、BUN含量降低，上述現(xiàn)象受到抑制。提示香菇多糖具有維持細胞正常生理功能運轉(zhuǎn)的功能，增加機體對運動負荷的承受力，具有抗疲勞功能。

MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，是衡量體內(nèi)自由基代謝的敏感指標。GSH-Px、SOD是機體內(nèi)常見的抗氧化酶類，其活性的強弱常用來衡量機體抗氧化能力。楊嵐[9]的研究認為，香菇多糖具有較強的抗氧化活性，能提升血和肝臟中GSH-Px、SOD活性，減少MDA生成及降低腦單胺氧化酶（MAO）活力。香菇多糖的體內(nèi)抗氧化實驗也表明，香菇多糖促進小鼠體內(nèi)抗氧化能力的提高[10]。本研究中，大強度運動導致骨骼肌組織自由基生成增多，抗氧化能力下降，作為較強的抗氧化化合物，香菇多糖能有效抑制骨骼肌自由基生成，提升抗氧化能力。原因為香菇多糖的活性成分能改善大鼠的供氧能力，改善機體循環(huán)功能，增強機體免疫力，提高抗氧化酶的活性，加快自由基的清除；香菇多糖中的活性成分抑制氧化酶的活性，降低氧自由基的生成。

4 結(jié)論

大強度運動導致機體外周血CK、BUN含量降低，骨骼肌組織氧化損傷，香菇多糖能抑制上述現(xiàn)象。結(jié)果表明，香菇多糖能維持細胞正常生理功能運轉(zhuǎn)，增加機體對運動負荷的承受力，提高骨骼肌組織抗氧化能力，具有抗疲勞功能。