韓世昊
(廣西大學行健文理學院,廣西 南寧 530005)
松茸(Tricholoma matsutake) 是一種十分珍貴的野生食用菌,至今仍無法人工栽培[1]。松茸具有獨特的香味,氣味芳香濃郁,含有人體所需的營養,而且還具有藥用保健功效,可以提高人體免疫力,其富含的雙鏈松茸多糖,可以激活人體T細胞,具有抗衰老、解疲乏的特殊功效,對非特異性免疫和特異性免疫具有確定的增強作用[2]。松茸的功效非常廣泛,民間也常用來強身補虛、恢復精力,被身體虛弱、術后產后等人群所喜愛,以減輕疲勞、快速恢復提高免疫力。竹蓀(Dictyophora indusiata) 則是一種是生長在枯竹根部的一種食用菌,營養豐富,富含多種氨基酸以及維生素,具有補氣養陰、潤肺止咳、清熱利濕、護肝利膽、抗疲勞等功效[3]。
松茸和竹蓀搭配不僅味道鮮美,營養價值也更高,松茸中松茸醇、異松茸醇和多糖類藥用成分具有抗氧化、抗腫瘤等藥用功效[4],同時也具有提高抵抗力、恢復體力等保健功效;而竹蓀中富含的氨基酸等有效成份可以補充人體營養元素,具有益氣補腦、寧神健體的作用。
運動員想要提高運動成績,往往需要長期高強度的訓練來保障,這會損害人體免疫系統,尤其是高強度的運動會使人體細胞時常處于無氧狀態,而過量運動會產生過多的氧自由基,破壞正常的免疫細胞,導致免疫細胞死亡,加速免疫力的下降。因此,對運動員來說,其免疫力恢復要比常人需要更多的時間。而真正能提高運動員免疫力的,是健康的飲食加上科學訓練方式,通過調節飲食等生活習慣來抵抗免疫力的下降。
就松茸竹蓀搭配的飲食,從體外抗氧化力調節的角度,對松茸竹蓀搭配方式的效果進行試驗,探討松茸竹蓀對提升運動員免疫力的影響。
松茸片和竹蓀干品均購自云南官渡區鑲毅藥材經營部,一級品(雜質含量小于0.1%,水分小于1%)。主要試劑:鄰苯三酚、過氧化氫、硫酸亞鐵由天津市天力化學試劑有限公司生產,分析純;水楊酸、乙醇由洛陽市化學試劑廠生產,分析純。
主要儀器設備:FW400A型高速萬能粉碎機,北京科偉永鑫實驗儀器廠;UV-722紫外可見分光光度計,上海第三分析儀器廠;NCSY-1實驗室烘箱,蘇州耐氏干燥設備有限公司;DA-8002型電子恒溫水浴鍋,北京市化玻聯醫療器械有限公司;AE124型電子天平,上海皓拂儀器儀表有限公司。
除去松茸片和竹蓀干品表面沙塵清洗干凈,竹蓀剪去菌蓋頭(菌體與菌裙連接部分封閉的一端),與松茸片一起在烹制前用40℃左右的溫淡鹽水泡發20 min,取出沖洗干凈,將竹蓀切小段,松茸也切小片后,放入烘箱中80℃下烘干至恒重,用粉碎機研磨成粉末,過80目篩后即得松茸和竹蓀的混合粉末,備用。
松茸竹蓀樣品溶液制備:將制備的松茸和竹蓀的粉末按1∶20的料水比混合,90℃水浴6 h,靜置30 min后2 500 r·min-1離心15 min,取上清液濃縮即得松茸竹蓀樣品溶液[5-6]。
稱取松茸竹蓀混合粉末樣品,分別配制濃度0.5 mg·mL-1、1.0 mg·mL-1、1.5 mg·mL-1、2.0 mg·mL-1、2.5 mg·mL-1的松茸竹蓀樣品溶液,備用;在20 mL的比色管中依次分別加入不同濃度的松茸竹蓀樣品溶液1.0 mL、pH 8.2的0.05 mol·L-1的緩沖溶液8 mL,在25℃恒溫水浴20 min后,精確移取該混合液5 mL于比色皿中,測定其在430 nm處的吸光度,記為H2;將測完吸光度的比色皿取出,向其中加入40 mmol·L-1的鄰苯三酚溶液0.2 mL,搖勻,準確反應3 min后,測定其在430 nm處的吸光度,記為H1;在20 mL的比色管中依次分別加入雙蒸水1 mL, pH 8.2的 0.05 mol·L-1的緩沖溶液 8 mL,25℃恒溫水浴20 min,精確移取該混合液2.0 mL于比色皿中,同時向其中加入40 mmol·L-1的鄰苯三酚溶液0.1 mL,搖勻,準確反應3 min,測定其在430 nm處的吸光度,記為H3,超氧陰離子自由基抑制率(E1,%) 計算公式為:
式中:H1為加入待測糖液后的吸光度;H2為無顯色劑時多糖的本底吸收;H3為不加糖液的空白對照液吸光度。
稱取松茸竹蓀混合粉末樣品,分別配制濃度0.5 mg·mL-1、1.0 mg·mL-1、1.5 mg·mL-1、2.0 mg·mL-1、2.5 mg·mL-1的松茸竹蓀混合粉末樣品溶液,備用;在25 mL的比色管中依次加入9.0 mmol·mL-1的Fe-SO4溶液 1.0 mL,9.0 mmol·mL-1水楊酸-乙醇溶液1.0 mL,雙蒸水 1.0 mL,8.8 mmol·mL-1雙氧水 1.0 mL,37℃反應0.5 h,以蒸餾水為空白,在520 nm處測定其吸光管度,并記為M1;將雙蒸水分別替換為不同濃度的松茸竹蓀混合粉末樣品溶液1.0 mL,并記為M2;將9.0 mmol·mL-1水楊酸-乙醇溶液替換成1.0 mL乙醇,重復上述過程并記為M3。羥自由基抑制率(E2,%)計算公式為:
式中:M1為不加糖液的空白對照液吸光度;M2為加入待測糖液后的吸光度;M3為無顯色劑時多糖的本底吸收。
利用鄰苯三酚遇水產生超氧陰離子自由基,生成有色的中間物質[7],其線性時間維持在3 min~4 min,因此在試驗選用了3 min為測定時間。當加入超氧陰離子自由基的抑制劑后,可以減小中間有色物質的產生,使吸光度減小。因此可以利用此方法來測定被測物對超氧陰離子自由基的抑制率。分別檢測不同濃度的松茸竹蓀混合溶液對超氧陰離子自由基的抑制率,測得的結果如表1、圖1所示。

表1 松茸竹蓀混合溶液對超氧陰離子自由基的抑制率Tab.1 The inhibition rates of mixed solution of Tricholoma matsutake and Dictyophora indusiata to O2-
從表1和圖1可以看出,松茸竹蓀混合溶液對超氧陰離子自由基有較強的清除作用,主要原因可能是由于松茸和竹蓀中均含有多糖類物質,多糖蛋白質中的C3、C4、C6上羥基較活潑,因此羥基上的氫活性很高,能夠快速和超氧陰離子自由基進行化學反應,所以超氧陰離子自由基反應被干擾阻斷,而且隨著松茸竹蓀混合溶液濃度的增加,對超氧陰離子自由基抑制率也有較大的提高,可能是由于結合在松茸竹蓀多糖大分子上的基團提高了對其結合為點周圍基團的活性,且其本身也可以被氧化成基團。因此會逐步增加清除的效果,曲線出現上揚趨勢。這說明松茸竹蓀混合溶液中的多糖類物質仍然保持其原有的特性,并在原有的基礎上有所提高。
利用Fenton反應原理[8],過氧化氫和二價的鐵離子反應產生強活性的羥自由基,水楊酸與其結合,并產生有色物質。該物質在520 nm處有強吸收,若在反應體系中加入具有清除羥自由基的被測物,便會與水楊酸產生反應,爭奪羥自由基,使羥自由基還原產生成有色物質,有色物質產生量減少使得吸光度也減小。因此可以利用此方法來測定被測物對羥自由基的清除率,即羥自由基的抑制率。分別檢測不同濃度的松茸竹蓀混合溶液對羥自由基的抑制率,測得的結果如表2、圖2所示。

表2 松茸竹蓀混合溶液對羥自由基的抑制率Tab.2 The inhibition rates of mixed solution of Tricholoma matsutake and Dictyophora indusiata to·OH
由表2和圖2可以看出,松茸竹蓀混合溶液對羥自由基的清除作用隨著濃度的增加而增加,而且隨著濃度增加清除效率也增強。當濃度在2.5 mg·mL-1時,抑制率達到最高的62.24%;5個不同濃度的松茸竹蓀混合溶液平均抑制率為38.41%
推測其主要原因是由于松茸和竹蓀中均含有多糖類物質,結合在松茸多糖上的基團對羥自由基有一定吸附作用。多糖類物質對免疫系統有調節能力,可以間接刺激巨噬細胞、淋巴T細胞等免疫細胞的活性,促使免疫細胞多分泌白細胞介素,從而刺激誘導人體白細胞產生更多的干擾素,可以有效防止病毒感染,從而促使人體免疫系統對病毒入侵的抵抗力。可見,松茸和竹蓀所含有的有效成份可以直接或間接地促進人體免疫細胞的殺傷力,改善機體的抗病毒能力,從而提高人體自身的免疫力。