銀屑病患者趨化素樣因子1、T淋巴細胞亞群及炎性因子的水平分析

劉容君，徐 淼，呂仁杰

(荊門市第二人民醫院:1.皮膚科；2.中醫康復科；3.腎內科，湖北荊門 448000)

銀屑病不但是一種基因遺傳疾病，也是一種慢性炎癥性皮膚病。銀屑病不及時治療，會導致各種疾病的發生，累及心臟、肝臟、腎臟等器官，如果患者發生感染還會危及生命。銀屑病春冬季發病率較高，臨床以鱗屑和紅斑為主，是在多種環境誘導因素的刺激下發生的免疫異常性、慢性炎癥性、增生性皮膚病[1]。銀屑病的誘因較多，發病機制至今尚未完全闡明，涉及許多免疫分子和細胞因子[2]。趨化素樣因子1(CKLF1)是影響銀屑病的一種因子，和銀屑病有密切關系，位于染色體16q22，由4個外顯子和3個內含子組成[3]。CKLF1是由免疫細胞和非免疫細胞分泌的細小蛋白顆粒[4]，可對免疫反應和過敏反應進行調節[5]，在造血和血管生成等一系列生理過程中發揮非常重要的作用[6]。銀屑病的皮膚損害可發于全身各處，但多見于頭皮、四肢伸側[7]。CKLF1的調控在機體的免疫反應及白細胞的趨化過程中起著重要的作用[8]，本研究主要對銀屑病患者CKLF1、T淋巴細胞亞群、炎性因子水平進行了分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年3月至2019年2月于本院門診確診的尋常型銀屑病患者34例作為觀察組，然后根據疾病發展程度又分為進行期組(26例)，靜止期組(8例)；年齡23～59歲，平均(41.6±4.2)歲；病程為5個月至1.5年。納入標準：年齡為20～60歲，無過敏史，近2個月內未接受過任何免疫抑制劑、維A類外用藥物者。排除標準：2個月內使用過藥物治療者；合并其他嚴重疾病的患者。另外，選取21例健康志愿者作為對照組。上述所有納入研究者均對本研究知情同意并簽署了知情同意書。

1.2儀器與試劑 流式細胞儀(Thermo公司)、生物顯微鏡(Olympus公司)、淋巴細胞分離液(美國Pierce公司)、CKLF1抗體(Tanon公司)、甲醛溶液(上海蘇彭化工)、冰箱(青島海爾公司)。

1.3方法

1.3.1觀察組和對照組血液標本的采集 抽取外周靜脈血5 mL，將采集的血液標本放入離心機，以3 000 r/min離心5 min，離心后將血清與紅細胞分別置于EP管中保存。

1.3.2外周血細胞的純化和T淋巴細胞亞群的檢測 用含肝素的采血管采集靜脈血4 mL，然后以2 000 r/min，離心15 min處理。去上清液后分裝，于冰箱貯存1 h。取出細胞，加入溶血劑使紅細胞充分溶解，得到純化后的外周血細胞。然后滴加適當比例稀釋的生物素標記抗體，于37 ℃孵育10 min，生物顯微鏡下觀察CD3+、CD4+、CD8+陽性細胞比例。

1.3.3采用流式細胞檢測CKLF1和炎性因子水平 用生理鹽水調整細胞密度為2.0×107/mL備用。待測的多管細胞懸液中加入PBS緩沖液50 μL，然后在不同的管中分別加入CKLF1、IL-1β、IL-6和TNF-α抗體(2 μL，1∶10稀釋)，充分混勻，4 ℃避光放置40 min。加入PBS液2 mL混勻，1 500 r/min離心5 min，去掉上清液后以1%甲醛溶液固定，測定細胞中CKLF1和炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α陽性細胞所占百分比。

2 結 果

2.12組間外周血細胞中CKLF1的表達水平分析 觀察組外周血細胞中CKLF1的表達水平為(3.76±1.31)%，對照組外周血細胞中CKLF1的表達水平為(13.29±5.05)%。對照組外周血細胞中CKLF1的表達水平高于觀察組，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2T淋巴細胞亞群的檢測 觀察組CD3+、CD8+T淋巴細胞比例分別為(46.41±8.21)%、(20.13±2.38)%，低于對照組的(68.16±1.84)%、(23.64±3.34)%，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 外周血T淋巴細胞各因子在銀屑病患者的表達

2.3外周血細胞中炎性因子的表達分析 觀察組外周血細胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的表達水平分別為(78.65±3.62)%、(74.76±5.52)%、(69.58±3.78)%，均高于對照組中相應指標的表達水平，差異均有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 IL-1β、IL-6、TNF-α對外周血細胞膜表達

2.4銀屑病患者治療前、后外周血T淋巴細胞、紅細胞、中性粒細胞中CKLF1表達水平的比較 治療前銀屑病患者T淋巴細胞、紅細胞、中性粒細胞中CKLF1表達水平均低于治療后，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 在治療前、后CKLF1表達

3 討 論

銀屑病發病較急，會導致皮膚破損，有紅斑生成[9]，伴隨關節發炎疼痛，雖然銀屑病是一種基因遺傳疾病，但此病的發生并不是由遺傳因素決定的[10]，他的誘發因素較多，主要涉及遺傳、免疫、感染、神經介質等方面[11]；CKLF1并不是信號傳導受體，更多的是作為一種高效的清除受體，發揮清道夫的作用，清除血液中的趨化因子[12]，參與促炎性細胞因子調控，作為調節因子在炎癥的免疫反應過程中發揮調節和緩沖作用[13]。研究表明，銀屑病患者存在天然免疫紊亂現象[14]，天然免疫系統失調及過度活化導致了炎癥反應的發生是銀屑病真正的啟始因素，引發自身免疫性T淋巴細胞反應而最終導致銀屑病發病[15]。

觀察組外周血細胞中CKLF1的表達水平明顯低于對照組。觀察組的CD3+、CD8+T淋巴細胞百分比明顯低于對照組。對照組與觀察組的CD4+/CD8+細胞比值無明顯差異。外周血細胞炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達分析顯示，觀察組外周血細胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的表達水平明顯高于對照組。銀屑病患者治療后T淋巴細胞、紅細胞、中性粒細胞中CKLF1的表達水平明顯高于治療前。

綜上所述,CKLF1能改變炎性因子的趨向化，使外周血淋巴細胞、紅細胞、中性粒細胞得到修復，其水平能反映臨床治療銀屑病的效果。