抗AB對(duì)ABO血型效價(jià)及新生兒溶血病的影響

曹明鵬 楊 勁 何安華 李尊嚴(yán) 趙 震 田 豐

O型孕婦常需在16～28 周檢測IgG抗體效價(jià)來預(yù)判新生兒出生后是否會(huì)患有新生兒溶血病，是因孕婦與體內(nèi)嬰兒ABO血型若不合，孕婦體內(nèi)的特異性IgG抗體可通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，與胎兒血循環(huán)中的紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，特異性結(jié)合在胎兒紅細(xì)胞表面，致敏的紅細(xì)胞在胎兒脾臟被巨噬細(xì)胞吞噬，破壞，從而導(dǎo)致新生兒黃疸、貧血、水腫、肝臟腫大，甚至死亡等溶血性癥狀[1]。抗AB是O型孕婦血清中區(qū)別抗A和抗B的另一種抗體，現(xiàn)被認(rèn)為是一種交叉反應(yīng)性抗體[2]。O型孕婦體內(nèi)IgG抗AB抗體在IgG抗A、抗B抗體效價(jià)檢測時(shí)也會(huì)被包含其中，但其作用尚不明確。筆者通過對(duì)比32 例O型的孕婦體內(nèi)IgG抗AB抗體的變化，分析抗AB效價(jià)與新生兒溶血病的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 2018年5月1日-2019年1月31日來我院臨床產(chǎn)科門診產(chǎn)前檢查中16～28周O型孕婦其丈夫?yàn)榉荗型，進(jìn)行ABO血型效價(jià)檢測。其中RhD均為陽性，不規(guī)則抗體檢測均為陰性。

1.2 儀器與試劑 0.2 mol/L 2-巰基乙醇，A/B型RhD(+)獻(xiàn)血員壓積紅細(xì)胞（自制），0.5%標(biāo)準(zhǔn)A1/B型RhD(+)懸浮紅細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）、長春博迅微柱凝膠檢測系統(tǒng)（包涵卡式離心機(jī)，恒溫孵育器，微柱凝膠卡等），37 ℃水浴箱。

1.3 檢測方法 采用2-巰基乙醇裂解，37 ℃吸收微柱凝膠法。主要步驟如下：①2-巰基乙醇裂解：取2.5 mLO型孕婦血清于試管中，再加入等量的2-巰基乙醇，混勻后密封置于37 ℃溫浴箱中1 h。②解封：1 h后將試管從水浴箱取出并解封，并使其在空氣中靜置10 min，使2-巰基乙醇揮發(fā)干凈。③IgG抗A、抗B抗體效價(jià)檢測：取出1.5 mL裂解后的O型孕婦血清，倍比稀釋后在微柱凝膠卡中分別加入50 微升AB型丈夫0.5%懸浮紅細(xì)胞，50 微升0.5%標(biāo)準(zhǔn)A1 型懸浮紅細(xì)胞，50 微升0.5%標(biāo)準(zhǔn)B型懸浮紅細(xì)胞，以此分別測出與丈夫紅細(xì)胞，與標(biāo)準(zhǔn)A1 型紅細(xì)胞，與標(biāo)準(zhǔn)B型紅細(xì)胞反應(yīng)的效價(jià)。④吸收IgG抗AB抗體：取0.5 mL裂解液兩份，一份加入1 mLA型獻(xiàn)血員壓積紅細(xì)胞，另一份1 mL B型獻(xiàn)血員壓積紅細(xì)胞，37 ℃溫浴箱中吸收2 h。⑤離心后所得上清液重復(fù)步驟④，檢測吸收是否完全：若A型獻(xiàn)血員壓積紅細(xì)胞吸收后的上清液與A型紅細(xì)胞在微柱凝膠卡中不反應(yīng)，則表示吸收完全，同理可知B型獻(xiàn)血員壓積紅細(xì)胞吸收后的上清液是否吸收完全。⑥測定吸收后IgG抗AB效價(jià)：取吸收后上清液，倍比稀釋后分別加入0.5%B/A1 型RhD(+)懸浮紅細(xì)胞，A型紅細(xì)胞吸收后的上清液用B型紅細(xì)胞反應(yīng)，B型紅細(xì)胞吸收后的上清液用A1 型紅細(xì)胞反應(yīng)，在微柱凝膠卡中測定IgG抗AB效價(jià)，分別記錄為吸收后與標(biāo)準(zhǔn)A1 細(xì)胞、吸收后與標(biāo)準(zhǔn)B細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料使用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 32 例O型孕婦（丈夫血型為AB型）測定IgG抗AB效價(jià) 其中IgG抗AB不同效價(jià)組的效價(jià)分布見表1。去除抗AB影響后共有11 例效價(jià)發(fā)生變化，2 例效價(jià)降低了2 個(gè)滴度，其余9 例效價(jià)均降低了1 個(gè)滴度，結(jié)果見表2。

表1 32例抗AB檢測效價(jià)滴度分布情況 (例)

表2 11例抗AB影響情況分析

2.2 按照與丈夫紅細(xì)胞反應(yīng)效價(jià)分組比較 4 組各組間存在抗AB的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.062，fisher檢驗(yàn)值=0.045），見表3。

表3 抗AB存在于抗丈夫紅細(xì)胞血型效價(jià)分組比較

2.3 新生兒溶血病的發(fā)生按存在抗AB分組比較 按存在抗AB分組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.929，fisher檢驗(yàn)值=0.002），見表4。

表4 抗AB存在與發(fā)生新生兒溶血病關(guān)聯(lián)情況

3 討 論

新生兒溶血病的發(fā)生會(huì)受到多因素的影響[3]。比如新生兒的基礎(chǔ)情況，孕婦的ABO血型效價(jià)及孕婦IgG抗體亞型等。

抗AB是O型孕婦血清中區(qū)別抗A和抗B的另一種抗體，未經(jīng)免疫的孕婦血液中也可以少量存在。吸收放散試驗(yàn)在輸血相容性檢測中準(zhǔn)確性和實(shí)用性很高[4～5]，故檢測抗AB影響時(shí)采用了吸收技術(shù)。本次研究發(fā)現(xiàn)32例O型孕婦其丈夫?yàn)锳B型的ABO血型效價(jià)中有11例存在抗AB的影響（占31.25%），其中針對(duì)于丈夫細(xì)胞的效價(jià)中有2例效價(jià)1:256，其中2例存在抗AB的影響（占100%）；12例效價(jià)為1:128，其中6例存在抗AB的影響，占50%；15例效價(jià)為1:64，其中2例存在抗AB的影響（占13.33%）；3例效價(jià)為1:32，其中1例存在抗AB影響（占33.33%）。其中高效價(jià)1:64以上的共9例。說明孕婦與丈夫紅細(xì)胞效價(jià)越高存在抗AB的影響也越多，高ABO血型效價(jià)孕婦生育新生兒后發(fā)生新生兒溶血可能會(huì)與抗AB的存在有關(guān)。但抗AB的存在不都會(huì)發(fā)生新生兒溶血病，可能與抗AB的IgG亞型有關(guān)，也可以解釋為什么低ABO血型效價(jià)的孕婦生育新生兒后也可以發(fā)生新生兒溶血病。本次回顧性分析未對(duì)抗AB的IgG亞型進(jìn)行鑒別，后續(xù)會(huì)對(duì)O型其丈夫?yàn)锳或B型的孕婦進(jìn)行抗A、抗B及抗AB的IgG亞型進(jìn)行檢測，試圖尋找出其IgG亞型與新生兒溶血病的關(guān)聯(lián)。本次研究選取的32對(duì)夫妻為孕婦為O型，丈夫?yàn)锳B型的樣本，這樣避免了新生兒出現(xiàn)純合子的情況，以此來防止稀釋新生兒溶血病的發(fā)生率。臨床產(chǎn)科門診產(chǎn)前檢查中對(duì)16～28周O型孕婦其丈夫?yàn)榉荗型（而本次研究是其中的一種情況即孕婦為O型，丈夫?yàn)锳B型）進(jìn)行ABO血型效價(jià)檢測。并把檢測結(jié)果作為孕中期孕婦服用中藥茵陳蒿湯的標(biāo)準(zhǔn)，并對(duì)高效價(jià)的孕婦進(jìn)行追蹤檢測服藥效果[6～7]，服藥的目標(biāo)是減少新生兒溶血病的發(fā)生。

綜上所述，O型的孕婦血清中含有三種抗體：抗A，抗B，抗AB（是一種交叉反應(yīng)性抗體）。抗AB在16～28 周O型孕婦檢測ABO血型效價(jià)時(shí)會(huì)影響效價(jià)。本次研究回顧分析了ABO IgG抗體中的抗AB對(duì)ABO血型效價(jià)高低的影響。進(jìn)一步說明孕婦血清中存在IgG-抗AB，由于實(shí)驗(yàn)中抗AB對(duì)效價(jià)影響有1 個(gè)和2 個(gè)滴度的影響，但這并不表示其不存在0-1 之間的滴度影響而實(shí)驗(yàn)中并未檢出的可能，即抗AB在人體內(nèi)含量存在個(gè)體差異性。