miRNA27a靶向GOLM1對非小細胞肺癌生物行為學的影響①

鄭 興 吳兆紅 陳崗東 王戈菲 潘有光 (廣州醫科大學附屬第三醫院心胸外科，廣州 510150)

肺癌是臨床上常見的呼吸系統惡性腫瘤，其死亡率在所有類型的惡性腫瘤中高居榜首，5年生存率僅為15%左右[1]。肺癌的主要病理類型為小細胞肺癌(small lung cancer，SLC)和非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)，其中非小細胞肺癌約占總發病率的85%[2]。非小細胞肺癌發病隱匿，易發生轉移和復發，因此對其發病機制的研究已成為非小細胞肺癌早期診斷和臨床治療的重中之重。微小RNA(miRNA)是廣泛存在于動植物中的一類具有調控功能的非編碼小分子RNA，全長約為18～25個核苷酸，主要通過互補配對的形式與其靶基因的3′非編碼區結合，進而誘導靶基因的降解或抑制靶基因的翻譯[3]。研究顯示，miR-27a在乳腺癌、胃癌、腎癌、肝癌、食管癌等多種惡性腫瘤中表達異常，并密切參與腫瘤細胞的增殖、分化及凋亡等病理生理過程[4,5]。本研究旨在探究miR-27a在非小細胞肺癌中的生物學功能及其作用機制。

1 材料與方法

1.1材料 人非小細胞肺癌細胞系A549購自上海中國科學院生物化學與細胞生物學研究所，30只SPF級，7周齡，體重(20～22)g的BALB/c雄性裸鼠購自北京維通利華實驗動物技術公司。RPMI1640培養基、胎牛血清均購自美國Gibco公司。plenti-GFP空載和plenti-GFP-miR-27a慢病毒載體由上海吉瑪制藥技術公司構建，GOLM1-WT和GOLM1-Mut熒光素酶報告載體由深圳市盎然生物技術有限公司構建。PEG8000、嘌呤霉素均購自上海生工生物工程有限公司。GOLM1兔單克隆抗體、HRP標記的羊抗兔二抗購自英國Abcam公司，Dual-Luciferase?Reporter Assay System熒光素酶檢測試劑盒購自美國Promega公司，CCK-8細胞增殖檢測試劑盒購自北京索萊寶生物科技有限公司。……