柴胡多糖對(duì)LPS誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷的機(jī)制研究

尹 俊 莊 紅 黃 璐 蔣 偉 代 天 張?zhí)K川

(江漢大學(xué)附屬醫(yī)院武漢市第六醫(yī)院心內(nèi)科,武漢 430000)

多糖類(lèi)化合物在自然界動(dòng)植物中廣泛存在，其具有抗氧化、抗病毒、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等多種功能[1,2]。柴胡(bupleurum)又稱(chēng)山地蔬菜和草，是傘形科(umbelliferae)的多年生草本植物，主要含有柴胡皂苷、甾醇、揮發(fā)油、脂肪油和多糖，具有疏散解熱、舒緩肝臟等功能[3,4]。多糖結(jié)構(gòu)是柴胡生物活性的基礎(chǔ)，其為柴胡的重要活性成分之一。因此柴胡多糖的功能研究對(duì)疾病的治療具有重要意義。本研究建立LPS誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞H9C2損傷模型，觀察柴胡多糖對(duì)其細(xì)胞活性、氧化應(yīng)激、炎癥因子分泌的影響，揭示其機(jī)制與調(diào)控MAPK/ERK5信號(hào)通路相關(guān)，為柴胡多糖的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1材料 乳鼠心肌細(xì)胞H9C2購(gòu)自上海雅吉生物科技有限公司；柴胡飲片購(gòu)自成都荷花池中藥材市場(chǎng)；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、MTT、胰蛋白酶均購(gòu)自美國(guó)Sellect公司；LDH、ROS、MDA、SOD、GSH-Px、TNF-α、IL-6檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自日本TaKaRa公司；PVDF膜購(gòu)自德國(guó)羅氏診斷有限公司；SDS-PAGE 試劑盒、ECL發(fā)光液和RIPA蛋白裂解液均購(gòu)自碧云天生物技術(shù)公司。Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海銳賽生物。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞模型的建立及分組 柴胡多糖的提取參考林浩等[5]的方法進(jìn)行提取，并配制成5、15、45、90 μg/ml 的含量，待用。參考劉丹等[6]的方法建立LPS誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷模型；參考武劍[7]對(duì)柴胡多糖使用劑量的研究設(shè)置柴胡多糖(5、15、45、90 μg/ml)劑量組與模型組心肌細(xì)胞共培養(yǎng)處理48 h，分別標(biāo)記為5 μg/ml柴胡多糖+LPS組、15 μg/ml柴胡多糖+LPS組、45 μg/ml柴胡多糖+LPS組、90 μg/ml 柴胡多糖+LPS組。

1.2.2MTT法檢測(cè)細(xì)……