慢病毒介導NFAT基因對HepG2細胞生物學行為的影響①

許 洋 張雅敏 王 建 楊 龍 劉子榮 (天津市第一中心醫院器官移植中心，天津 300192)

活化T細胞核因子(nuclear factor of activated T cell,NFAT)最初作為與人T細胞中IL-2啟動子的抗原受體應答元件-2(ARRE-2)相結合的誘導型核因子被發現[1]。NFAT家族包括5名成員：NFATc1(也稱NFAT2)、NFATc2(NFAT1)、NFATc3(NFAT4)、NFATc4(NFAT3)和NFAT5，當細胞受到信號刺激時，通過鈣離子/鈣調蛋白激酶信號通路，使 NFAT 蛋白迅速去磷酸化，進入細胞核內，與 NFAT 靶基因上的位點結合發揮其介導的基因轉錄調節功能。NFAT信號傳導的失調與腫瘤惡性表型和腫瘤進展有關，其已顯示出在調節腫瘤的發生發展，細胞的增殖、分化、侵襲、轉移、血管形成和腫瘤微環境中起到的重要作用[2]。血管內皮生長因子A(VEGFA)作為血管生成刺激因子，在血管生成的調節中起重要作用，是血管系統發育和分化所必需的，當它與血管內皮生長因子受體(VEGFR)結合后，會使眾多通道上游和下游信號形成級聯，最終增強內皮細胞周圍組織的增殖、遷移、通透和滲透能力。然而NFAT在肝癌中的作用并沒有明確，并且在肝癌中NFAT與VEGFA的關系不清楚，為進一步探索NFAT蛋白與肝癌發生發展及其惡性特征的關系，本實驗將利用shRNA干擾技術，觀察干擾NFAT基因對于人肝癌HepG2細胞生長增殖、細胞侵襲遷徙及對VEGFA分子表達的影響，進一步揭示 NFAT 相關通路與臨床肝癌發生發展的關系。

1 材料與方法

1.1材料與試劑 肝細胞癌細胞系HepG2購自北京協和細胞中心，DMEM高糖液體培養基、胎牛血清購自美國Gibco公司，兔抗人NFAT多克隆抗體、兔抗人GAPDH多克隆抗體購自英國Abcam公司，羊抗兔IgG—HRP第二抗體購……