白茅苷抑制AKT的活化對宮頸癌細(xì)胞增殖、凋亡和線粒體膜電位的影響①

吉 潔 馬志君 曹振東 邵雪齋 申興斌 王曉芬

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，承德 067000)

宮頸癌是發(fā)展中國家最常見的癌癥類型之一，是世界第四位最常發(fā)生的婦科癌癥[1]。宮頸癌的治療是手術(shù)、化療和放療[2]。但由于癌癥具有增殖，侵襲和遷移的強(qiáng)大能力，晚期宮頸癌患者的預(yù)后仍然較差，其5年生存率約為16.5%[3]。因此，靶向抑制增殖、侵襲和遷移的有效抗癌劑對宮頸癌患者具有高度科學(xué)和臨床價值。白茅苷也稱歐前胡素，是提取自中藥白芷、獨(dú)活和當(dāng)歸中的有效成分，具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿、解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤的功效[4]。已有研究表明歐前胡素通過靶向于Mcl-1增強(qiáng)多柔比星對宮頸癌細(xì)胞的殺傷活性[5]，但白茅苷對宮頸癌治療的具體機(jī)制仍尚不清楚。本文旨在研究白茅苷對宮頸癌細(xì)胞增殖，凋亡和線粒體膜電位的影響。

1 材料與方法

1.1材料 白茅苷(I6659)購自美國Sigma-Aldrich，化學(xué)式：C16H14O4，分子量：270.28，純度≥98；Dulbecco′s modified Eagle′s medium培養(yǎng)基(12100-046)、胎牛血清(10082-147)、胰蛋白酶(25200-056)、青-鏈霉素(15140-122)購自美國Gibco公司；CCK-8試劑盒(C0037)、BCA蛋白濃度測定試劑盒(P0012S)、Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(C1062S)購自上海碧云天生物技術(shù)研究所；Anti Ki67(ab15580)、PCNA(ab18197)、Bax(ab53154)、Bcl-2(ab196495)、AKT(ab18787)購自美國Abcam公司，宮頸癌SiHa細(xì)胞株來源于中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細(xì)胞庫。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)于10%胎牛血清和1%青-鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基中，并放置在37℃，5% CO2恒溫培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)基每2～3 d更換一次，當(dāng)需要收集細(xì)胞時，用0.25%胰蛋白酶消化。試驗(yàn)用細(xì)胞為對數(shù)生長期細(xì)胞。

1.2.2CCK-8法檢測細(xì)胞活力 將宮頸癌SiHa細(xì)胞接種于96孔板(100 μl/孔)孵育24 h后,用不同劑量(0、1、2.5、5、10、25、50、100、200、300、400、500 μmol/L)處理細(xì)胞，每孔加入10 μl CCK-8溶液孵育4 h，在450 nm處用酶標(biāo)儀測定OD值。……