赤峰地區2 488例女性人乳頭瘤病毒感染特征分析1

馬 成，莫殿軍，崔智慧△，劉金元，李亞波

(赤峰學院附屬醫院：1.中心實驗室；2.檢驗科，內蒙古赤峰 024005；3.上海鼎晶生物醫藥科技股份有限公司，上海 201203)

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種無包膜的二十面體衣殼蛋白病毒，屬于一種雙鏈小DNA病毒，由病毒蛋白外殼L1和L2及遺傳物質DNA組成[1]，具有明顯的種屬特異性，人是其唯一宿主，HPV主要感染人的皮膚和黏膜，致使人體呼吸道、生殖道和皮膚等出現不同程度的病變。宮頸癌的發病率呈現出增高和年輕化的趨勢，許多研究證實，HPV感染與宮頸癌密不可分。目前，已發現200多種HPV亞型，依據其致病力強弱分為高危型和低危型，其中，高危型與多種惡性腫瘤的發生密不可分，如乳腺癌、結直腸癌等[2-3]，為宮頸癌和癌前病變的致病因素；低危型主要誘發外生殖器的尖銳濕疣和子宮頸上皮低級別的非典型增生(CINI)且不引起惡性病變。另外，HPV感染具有地域和年齡的差異，本文分析赤峰地區2 488例HPV檢測結果并進行統計分析，為赤峰地區女性宮頸癌的預防、診斷和治療提供臨床參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年11月至2019年3月在婦科門診就診及進行健康體檢的女性受試者2 488例為研究對象，排除病歷資料不完整、月經期或嚴重疾病及標本細胞過少或不合格的患者，對其以年齡段為分組依據，分為≤30歲組，31～40歲組，41～50歲組，≥51歲組。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器 可調試混勻儀(大龍，MS-X)；低溫高速離心機(eppendorf，Centrifuge 5424R)；恒溫金屬浴(上海滬析，HX-20)；實時熒光定量PCR儀(Thermo fisher，ABI 7500)；基因擴增儀(杭州晶格，K960)；數顯恒溫水浴鍋(國華電器，HH-2)；分子雜交儀(興化市分析儀器，FYY-3)；轉移脫色搖床(海門其林貝爾，TS-8)。

1.2.2試劑 HPV基因分型(25種分型)檢測試劑盒購自艾康生物技術(杭州)有限公司，可分型檢測25種HPV亞型，包括14種高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73)；3種疑似高危型(HPV26、53、66)；8種低危型(HPV6、11、40、42、43、44、81、83)。

1.3PCR-反向點雜交法原理 試劑盒采用PCR體外擴增和DNA反向點雜交相結合的基因檢測技術，通過HPV特異引物，擴增出25種目的片段，與膜條上特異性探針雜交，依據雜交信號判斷HPV基因型。

1.4方法

1.4.1標本的采集 醫護人員采用擴陰器擴陰以暴露宮頸，用棉拭子擦去宮頸口過多的分泌物，換取HPV專用采集拭子伸入宮頸，通過上皮交界處旋轉3～4周以獲得足夠的宮頸脫落細胞，將其放入HPV專用的細胞保存液中，密封送檢，4 ℃保存，1周內完成檢測。

1.4.2HPV分型檢測 標本的處理：標本充分震蕩混勻后吸取1.0 mL于1.5 mL EP管中，12 000 r/min離心5 min，棄掉上清留沉淀；HPV陰性、陽性質控品和標本沉淀分別加入混勻的50 μL核酸提取液，混勻后100 ℃干浴10 min，12 000 r/min離心10 min，上清供PCR擴增備用。試劑配制與上樣：依據檢測標本數量配置PCR反應液，分別取標本、陰性和陽性質控品上清液5 μL于PCR反應液中，按照說明書中PCR反應條件進行擴增。雜交、洗膜、顯色和結果判讀均嚴格按照說明書進行。

1.5統計學處理 采用SPSS21.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率或構成比表示，采用χ2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HPV感染率及各亞型分布情況 送檢2 488例標本中共檢出HPV陽性標本730例，總感染率為29.34%(730/2 488)，共檢出24種亞型(高危亞型17種，低危亞型7種)，其中低危亞型HPV83沒有檢出，高危亞型占前3位的分別為HPV52(132例)、HPV16(129例)和HPV58(107例)，低危亞型占前3位的分別為HPV42(66例)、HPV81(44例)和HPV43(41例)，各亞型分布情況見表1。

表1 HPV各亞型感染分布情況

2.2HPV單一亞型感染與多重亞型感染情況 730例陽性標本中，單一亞型占479例，陽性構成比為65.62%；多重亞型占251例，陽性構成比為34.38%，因此，HPV主要以單一亞型感染為主，見表2。

表2 單一亞型感染和多重亞型感染分布情況

2.3陽性標本中高危亞型、低危亞型和混合亞型感染情況 730例陽性標本中，高危亞型519例，陽性構成比為71.10%；低危亞型105例，陽性構成比為14.38%；混合亞型106例，陽性構成比為14.52%，因此，HPV主要以高危亞型感染為主，見表3。

表3 高危、低危和混合亞型分布情況

2.4不同年齡組中HPV感染陽性率比較 730例陽性標本在4個年齡組陽性例數分布情況為102、258、239和131例；陽性構成比為13.97%、35.34%、32.74%和17.95%；檢出率分別為29.74%、27.92%、28.25%和34.93%。因此,各年齡段陽性構成比存在明顯差異,且最高年齡段在31～40歲；檢出率在各年齡組間差異不明顯(χ2=7.065，P=0.07)，見表4。

表4 各年齡段HPV感染亞型分布情況

3 討 論

宮頸癌是臨床最常見的婦科惡性腫瘤之一，其發病率僅次于乳腺癌，嚴重威脅女性生命與健康，其早期臨床癥狀不典型，一旦出現明顯癥狀與體征時，臨床提示腫瘤惡性程度較高，死亡風險較大[4]。但是，宮頸癌的發生與發展分為3個連續性的階段，即宮頸上皮內瘤變、原位癌和浸潤癌，經歷至少10年甚至更長時間。因此，對宮頸癌的早期篩查、預防、診斷與治療尤為重要[5]。1996年，世界衛生組織認為HPV-DNA是引發宮頸癌的關鍵致病因子，HPV-DNA的基因分型檢測可以作為宮頸癌早期篩查的依據。

HPV感染分布具有地理區域性和年齡差異，不同國家和地區的宮頸癌發生與HPV不同型別感染具有相關性，且宮頸癌的檢出率呈現年輕化的趨勢。

本文對赤峰地區2 488例標本進行HPV基因分型檢測，感染率為29.34%，單一亞型陽性構成比為65.62%，高危亞型感染以HPV52、16、58、53、51為主，與洪萍等[6]2019年3月報道的HPV感染譜分布特點基本一致，說明相近時間段北方地區HPV感染譜具有趨同性。

對比本院檢驗科李樹敏等[7]2016年的報道，報道顯示，赤峰地區HPV陽性率(23.21%)、單一亞型陽性構成比(37.14%)和高危亞型感染優勢型別(HPV16、18、31、33、52)與本研究結果存在差異，原因可能與時間、季節、受檢人群和標本量有關。在我國HPV感染和宮頸癌發病率每年呈上升趨勢；且有報道稱各季節高危亞型HPV感染略有差異，HPV16、58、52四季中常見，HPV31春季常見，HPV18夏季常見，HPV33秋季常見[8]。本文選取標本時間主要集中在冬季，因此，HPV18、31、33高危亞型相對較少；且李樹敏等[7]入組人群為婦科就診患者，不包括體檢人群，大多存在婦科炎癥問題和不同程度的宮頸病變，與宮頸腺癌相關的HPV18所占比例升高[9-11]，HPV多重亞型感染與宮頸上皮內病變呈正相關[12]，所以李樹敏等[7]報道以多重亞型感染為主。既往研究證實，女性宮頸疾病的嚴重程度與HPV感染亞型、多重感染亞型和感染持續時間成正相關。

本研究結果顯示，HPV陽性率(29.34%)高于內蒙古自治區中西部的23.3%[13]，低于邯鄲地區的36.26%[14]；感染優勢型別(HPV52、16、58、53、42)與任妹等[15]報道我國常見HPV感染型別(HPV16、18、52、58、33)存在差異，以上數據顯示，HPV感染分布存在時間、季節、人群和地理區域性差異。

本研究將女性受試者按年齡分為4組，陽性構成比占比較高的為31～40歲和41～50歲年齡組，且31～40歲最高。因此，加強本年齡組的篩查有利于宮頸癌的防治；各年齡組間檢出率差異無統計學有意義(P=0.07)，因為研究對象以來院就診患者居多，存在不同程度癥狀，檢出率在各年齡組間趨于一致。

本地區HPV高危亞型、低危亞型和混合亞型陽性構成比分別為71.10%、14.38%和14.52%，高危亞型中前3位為HPV52、16和58，與邯鄲地區HPV感染高危亞型前3位存在差異[14]，而HPV16、58和52亞型在亞洲人群中，尤其是中國高發地區具有重要指導意義。

綜上所述，隨著宮頸癌項目篩查的進行，HPV疫苗的普及，公眾健康意識的提高，就醫人群結構和目的發生變化，區域性HPV感染譜呈現動態過程。本研究進一步更新和補充了區域性數據庫，為本地區HPV最新流行情況、宮頸癌的篩查、預防和治療提供理論依據，具有重要的指導意義。