子宮內(nèi)膜癌中β-內(nèi)酰胺絲氨酸樣蛋白的表達(dá)及臨床意義

杭晨，印永祥，趙華，張金秋，蔣新顏

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫婦幼保健院1. 婦科，2. 病理科，3. 放射科，江蘇 無錫 214002)

根據(jù)病因和臨床病理特征，子宮內(nèi)膜癌可主要分為Ⅰ型和Ⅱ型[1]。Ⅰ型通常是依賴于雌激素的子宮內(nèi)膜樣腺癌，占所有子宮內(nèi)膜癌的80%；Ⅱ型占20%，代表分化和預(yù)后較差的腫瘤類型[2-3]。β-內(nèi)酰胺絲氨酸樣蛋白(Beta-lactamase-like protein，LACTB)是來自線粒體核糖體大亞基的39 S蛋白質(zhì)，抑制乳腺癌細(xì)胞增殖，其作用機(jī)制涉及改變線粒體脂質(zhì)代謝和乳腺癌細(xì)胞的分化[4]。但LACTB在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用尚不清楚，本文旨在初步探討LACTB在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及其與患者臨床病理參數(shù)之間的聯(lián)系。

1 對象與方法

1.1 病例

收集2014年1月至2016年12月于南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫婦幼保健院因子宮內(nèi)膜病變行子宮切除術(shù)的89例子宮內(nèi)膜癌患者子宮組織的存檔蠟塊。患者術(shù)前均未接受輔助放療、化療或激素治療，且術(shù)前肝腎功能正常，術(shù)后常規(guī)病理確診。其中，≥50歲58例，<50歲31例。年齡36～75歲，中位年齡55.6歲。選擇同期因非子宮內(nèi)膜因素切除子宮且術(shù)后病理證實(shí)為正常子宮內(nèi)膜的21例存檔蠟塊作為對照組，年齡38～65歲，中位年齡54.5歲。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)和患者知情同意。

根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會子宮內(nèi)膜癌的分類，將子宮內(nèi)膜樣腺癌Ⅰ級和Ⅱ級歸類為Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌，透明細(xì)胞、漿液性、黏液性癌和子宮內(nèi)膜樣子宮內(nèi)膜癌Ⅲ級歸類為Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌；其中Ⅰ型64例和Ⅱ型25例。臨床分期Ⅰ～Ⅱ期71例，Ⅲ～Ⅳ期18例。

1.2 免疫組織化學(xué)法檢測子宮內(nèi)膜組織中LACTB的表達(dá)

兔抗人多克隆抗體濃縮型LACTB(1 ∶1 600)為美國Proteintech公司產(chǎn)品；兔抗人單克隆抗體雌激素受體(etrogen receptor，ER)、兔抗人單克隆抗體孕激素受體(progesterone receptor，PR)即用型抗體購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。基于聚合物的免疫組織化學(xué)二抗檢測系統(tǒng)(EnVision)采用丹麥DAKO公司的HRP標(biāo)記的抗兔/鼠IgG產(chǎn)品。

將存檔石蠟組織行5 μm切片，二甲苯脫蠟，無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇梯度水化；采用檸檬酸鹽緩沖液(pH=6.0)行熱抗原修復(fù)，高壓鍋加熱噴氣2.5 min；室溫冷卻30 min；流水沖洗至室溫；0.3%過氧化氫室溫孵育10 min；PBS沖洗；滴加一抗室溫孵育60 min；PBS沖洗3次；滴加二抗室溫孵育20 min；PBS沖洗3次；抗原抗體復(fù)合物用DAB顯色10 min，蘇木精復(fù)染1 min；以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷

采用雙盲法對免疫組化結(jié)果行半定量評分。LACTB蛋白表達(dá)陽性為細(xì)胞質(zhì)中呈棕黃色。著色強(qiáng)度評分：無著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；著色范圍以陽性細(xì)胞所占百分比評分：無陽性細(xì)胞計(jì)0分，陽性細(xì)胞≤25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，>50%計(jì)3分；著色強(qiáng)度評分與著色范圍評分之積取其平均數(shù)，>2分為陽性，≤2分為陰性。

ER、PR蛋白陽性為細(xì)胞核中呈棕黃色，陽性細(xì)胞數(shù)>10%即為陽性。

1.4 利用Kaplan-Meier Plotter數(shù)據(jù)庫及其自帶軟件對子宮內(nèi)膜癌患者行生存分析

設(shè)定條件： ① 腫瘤，子宮內(nèi)膜癌； ② 基因：LACTB，患者分割方法(“split patients by”)，自動選擇最佳截止值； ③ 生存，總生存期或無進(jìn)展生存期。根據(jù)設(shè)定的條件，默認(rèn)選擇基因表達(dá)值和生存信息完整的數(shù)據(jù)納入分析。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料組間比較采用Pearsonχ2檢驗(yàn)，組間生存時(shí)間的比較采用Log-Rank法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LACTB、ER和PR蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中LACTB蛋白陽性表達(dá)率(50.30%，51/89)明顯低于正常子宮內(nèi)膜組織(90.47%，19/21，χ2=5.866，P<0.05)。子宮內(nèi)膜癌組織中ER陰性17例，ER陽性72例；PR陰性20例，PR陽性69例。見圖1和圖2。

圖1 LACTB在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)(×200)

圖2 ER和PR在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)(×200)

2.2 子宮內(nèi)膜癌組織中LACTB表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

子宮內(nèi)膜癌組織臨床分期Ⅰ～Ⅱ期LACTB蛋白表達(dá)率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)；其表達(dá)與年齡分組無關(guān)(P>0.05)；Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌LACTB蛋白表達(dá)率低于Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與ER陽性相比，ER陰性組LACTB蛋白陽性表達(dá)率明顯增加(P<0.05)；與PR陽性相比，PR陰性組LACTB蛋白陽性表達(dá)率也明顯增加(P<0.05)。見表1。

表1 子宮內(nèi)膜癌組織中LACTB表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 例(%)

2.3 子宮內(nèi)膜癌組織中LACTB蛋白表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

在線數(shù)據(jù)進(jìn)行生存分析結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌患者LACTB陽性組總生存期和無進(jìn)展生存期高于LACTB陰性患者，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.29，0.32)。見圖2。

圖2 子宮內(nèi)膜癌患者總生存期和無進(jìn)展生存期生存曲線分析

3 討論

研究顯示，LACTB在不同腫瘤中呈低表達(dá)，包括乳腺癌、膠質(zhì)瘤等，其通過抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲轉(zhuǎn)移發(fā)揮抑癌基因的作用[4-5]。本研究結(jié)果顯示，LACTB陽性表達(dá)率在子宮內(nèi)膜癌組織中顯著降低，且隨臨床分期增加而降低。LACTB低表達(dá)可能促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌增殖和侵襲轉(zhuǎn)移。肝細(xì)胞癌和膠質(zhì)瘤中LACTB低表達(dá)與不良預(yù)后相關(guān)[5-6]。我們通過用Kaplan-Meier Plotter 對在線子宮內(nèi)膜癌數(shù)據(jù)庫進(jìn)行生存分析，發(fā)現(xiàn)LACTB陽性表達(dá)者預(yù)后優(yōu)于陰性表達(dá)患者，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，LACTB表達(dá)可能與子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后無關(guān)。

目前關(guān)于子宮內(nèi)膜癌的形態(tài)學(xué)分型存在爭論。根據(jù)Bokhman分類，將子宮內(nèi)膜腺癌歸為Ⅰ型，漿液性、透明細(xì)胞子宮內(nèi)膜癌歸為Ⅱ型[7]。也有定義Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌以漿液性或透明細(xì)胞組織學(xué)為特征，包括低分化癌肉瘤或未分化癌[8-9]。子宮內(nèi)膜腺癌組織學(xué)Ⅲ級與子宮乳頭狀漿液性癌和透明細(xì)胞癌有相似的臨床表現(xiàn)、免疫組織化學(xué)特征和預(yù)后不良，故認(rèn)為子宮內(nèi)膜腺癌組織學(xué)Ⅲ級最好歸為Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌[10]。根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會的分類，我們將子宮內(nèi)膜樣腺癌組織學(xué)Ⅰ級和Ⅱ級歸為Ⅰ型，透明細(xì)胞、漿液性、黏液性癌和子宮內(nèi)膜腺癌組織學(xué)Ⅲ級歸為Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌。結(jié)果顯示，Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌LACTB蛋白陽性率低于Ⅱ型，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，有可能與標(biāo)本量少、病例差異有關(guān)。有意思的是，我們發(fā)現(xiàn)與ER陽性組相比，ER陰性組LACTB蛋白陽性表達(dá)率明顯增加；與PR陽性組相比，PR陰性組LACTB蛋白表達(dá)率也明顯增加。有文獻(xiàn)報(bào)道，雌激素在線粒體平衡中起重要作用，其以細(xì)胞特異性的差異表達(dá)和定位介導(dǎo)的直接和間接機(jī)制協(xié)調(diào)和整合細(xì)胞代謝和線粒體活性[11]。最新研究表明，雌激素可以對線粒體產(chǎn)生直接和間接作用，促進(jìn)或保持病理環(huán)境下的線粒體功能[12]。由此說明，LACTB作為一種線粒體蛋白，其表達(dá)可能受雌激素調(diào)控。

綜上所述，LACTB在子宮內(nèi)膜癌中呈低表達(dá)，其低表達(dá)可能與臨床分期、ER以及PR相關(guān)，提示LACTB低表達(dá)可能促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的臨床進(jìn)展。