禽白血病病毒p27抗原的原核表達及其結合性多肽的篩選

姬向波，張立恒,李新鋒，曹天行, ，陳中衛, 3，張春霞,4

(1.河南牧業經濟學院 實驗研究中心，河南 鄭州 450046； 2.河南牧業經濟學院 動物醫學院，河南 鄭州 450046； 3.河南牧業經濟學院 動物科技學院，河南 鄭州 450046;4.河南省非常規飼料資源創新利用重點實驗室，河南 鄭州 450046)

ALV屬于α反轉錄病毒群病毒屬成員，可誘發禽類多種良性或惡性腫瘤，易導致感染雞群免疫抑制、生長抑制等生產性能下降[1]。該病毒主要通過種蛋垂直傳播、公雞精液帶毒傳播，雛雞間易發生水平傳播，易造成巨大經濟損失[2-3]。目前尚無有效的藥物和疫苗預防禽白血病，篩選與該病毒主要表面抗原p27的特異性多肽，開發診斷試劑盒，用于診斷該病原具有廣闊的發展前景。

噬菌體表面展示可快速地篩選獲得高親和力多肽。Smith(1985)等最早報道將外源基因利用基因工程的方法加入噬菌體的基因組，使外源多肽與噬菌體表面的外殼蛋白共同展示在噬菌體顆粒表面[4]。Scott(1990)等首次實現隨機多肽與噬菌體表面蛋白共同展示在噬菌體顆粒表面，建立噬菌體隨機展示肽庫[5]。噬菌體展示技術與單克隆抗體統制方法相比，具有周期短、成本低等優點。因此，本試驗利用噬菌體展示技術，篩選ALV p27蛋白特異性結合多肽，為后期利用多肽制備ALV-p27 ELISA檢測試劑盒奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

Ph.D.噬菌體展示肽庫及其宿主菌E.coli ER2738(NEB公司)，表達ALV p27抗原的菌株pET30a-p27為前期構建保存的甘油菌；鎳瓊脂糖親和層析柱(中科森輝微球技術有限公司)，蛋白Marker、4S Green Plus核酸染料、IPTG等均購自上海生工，測序和鑒定引物由上海生工合成，Agrose(河南東格生物公司)。……