液質聯用法測定果蔬中氨基甲酸酯類農藥殘留

褚乾梅 黃大明 朱夢潔 王雪 張姝娟 董菁 王盾

摘要：建立果蔬中多菌靈、啶蟲脒、甲萘威等12種氨基甲酸酯類農藥的QuEchERs結合高效液相色譜-串聯質譜的檢測方法。樣品經乙腈提取，應用QuEchERs技術凈化，經0.22 μm微孔濾膜過濾，以乙腈-5 mmol/L醋酸銨溶液（含0.1%甲酸）為流動相梯度洗脫，并在ZOBRAX EclipseXDB-C18柱上實現12種農藥的基線分離。該方法采用多反應監測（MRM）正離子模式掃描，標準曲線外標法定量。結果表明，12種待測物在各自的濃度范圍內線性關系良好，相關系數均不小于0.996 6，檢出限為0.1 μg/L。在三個不同添加水平下的平均回收率為80%～127%，相對標準偏差為1.1%～10.2%。該方法操作簡單，凈化效果好，靈敏度高，可用于果蔬中12種氨基甲酸酯類農藥殘留的快速分析。

關鍵詞：高效液相色譜-串聯質譜;果蔬;QuEchERs;氨基甲酸酯類農藥;檢測

中圖分類號：O657.7+2;S481+.8? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）21-0163-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.21.035

Abstract： A high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric method with modified QuEchERs method for sample preparation was developed for the simultaneous determination of 12 carbamate pesticides in vegetables and fruits. The samples were extracted with acetonitrile，purified with QuEchERs method and filtrated by 0.22 μm microporous filters. The separation was carried on an ZOBRAX EclipseXDB-C18 Colum（150 mm×4.6 mm，5 μm） by a gradient elution using methanol -5 mmol/L ammonium acetate solution（contain 0.1% formic acid aqueous）as mobile phase. The analytes were detected by tandem mass spectrometry under multiple reaction monitoring（MRM） mode with positive electrospray ionization（ESI+） and quantified by external standard calibration method. The correlation coefficients of the standard calibration curves for the 12 analytes were all above 0.996 6. The limits of detection was 0.1 μg/L. The blank samples were fortified at three leves，and the average recoveries ranged from 80.0% to 127.0% with the RSDs from 1.1% to 10.2%. The method developed was easy to operate，sensitive，and had good purification effect. It could be applied for the rapid determination of 12 carbamate pesticides in vegetables and fruits.

Key words： high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; vegetables and fruits; QuEchERs; carbamate pesticides;detection

氨基甲酸酯類農藥以其殘效小、選擇性強、對人畜毒性較低等特點而被國內外廣泛應用于病蟲害的防治[1，2]。作為高毒有機氯農藥的替代品，氨基甲酸酯類農藥通過抑制乙酰膽堿酯酶的活性而引起神經遞質乙酰膽堿的積累，造成神經功能紊亂，其在果蔬中的過量殘留或長期暴露在環境中會對人們的身體健康造成一定的危害[3，4]。

目前果蔬中該類農藥的殘留分析有高效液相色譜熒光法[5]、液相色譜-質譜聯用法[6-8]、氣相色譜法[9]和氣相色譜質譜法[10]。而液相色譜-飛行時間質譜法用于農產品中農藥殘留分析為目前殘留分析研究的熱點[11]。高效液相色譜熒光法靈敏度高，選擇性強，但在實際樣品中，由于基質不同，個別蔬菜種類有較強干擾，無法做出進一步的確證[12]。液相色譜—三重四極桿串聯質譜靈敏度高，抗干擾能力強，是目前痕量分析的首選方法[13]。快速、簡單、廉價、高效、可靠和安全的分散固相萃取（QuEchERs）技術可用于果蔬中農藥殘留檢測[14-16]。

試驗采用改進的QuEchERs方法提取、凈化樣品，結合高效液相色譜-串聯質譜儀檢測，建立12種氨基甲酸酯類農藥殘留的快速檢測方法，以期為果蔬中氨基甲酸酯類農藥殘留的檢測方法作補充，為襄陽市農產品質量安全監管部門日常監督提供科學、客觀的技術依據。

1? 材料與方法

1.1? 材料與儀器

果蔬樣品：采用四分法取適量樣品，用食品加工機將樣品粉碎，裝入保鮮盒中，于-18 ℃冰柜中保存，備用;氨基甲酸酯類農藥標準品儲備液（100 μg/mL）：多菌靈、啶蟲脒、克百威、甲萘威、嘧霉胺、苯醚甲環唑、噠螨靈、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（甲維鹽）、咪鮮胺、烯酰嗎啉、嘧菌酯、涕滅威亞砜均購于天津環保所;甲醇、乙酸銨為色譜級（JetBaker）;乙腈，甲酸為色譜級（Fisher）;試驗用水為娃哈哈純凈水;0.22 μm有機濾膜（津騰）;Bond Elut EN萃取鹽包（內含4 g MgSO4、1 g NaCl，1 g檸檬酸氫鈉及0.5 g檸檬酸氫二鈉）和15 mL凈化管（內含885 mg MgSO4、150 mg PSA及15 mg GCB）均購自美國Agilent公司。

1.2? 儀器與設備

Agilent 1260超高效液相色譜系統，包括四元泵，在線真空脫氣機，柱溫箱，自動進樣器（安捷倫公司）;API3200質譜儀，配有電噴霧離子源（ESI）（美國AB公司）;食品加工機（上海博朗）;CP4102電子天平（上海奧豪斯）;超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;5810R低溫冷凍離心機（美國Eppendorf公司）;MS3渦旋混勻器（德國IKA公司）。

1.3? 方法

1.3.1? 標準溶液的配制? 分別取400 μL 100 μg/mL的12種標準溶液加入到10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混勻，配制成4 μg/mL的混合標準中間液，-18 ℃避光保存。混合標準工作液根據需要用甲醇配制。

1.3.2? 樣品制備? 準確稱取10.0 g粗粉碎的蔬菜樣品置于50 mL離心管中，加10 mL乙腈和陶瓷均質子，渦旋振蕩1 min，加入Bond Elut EN萃取鹽包，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min，取6 mL乙腈上清液加入到含有凈化吸附劑和硫酸鎂的15 mL凈化管中，渦旋振蕩1 min，8 000 r/min離心5 min。準確吸取1 mL上清液過0.22 μm有機濾膜，待HPLC-MS/MS分析。

1.3.3? 儀器條件

1）色譜條件。色譜柱：ZOBRAX EclipseXDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：A為5 mmol/L乙酸銨溶液（含0.1%甲酸），B為甲醇;梯度洗脫程序：0～6 min，90% A→10% A;6～10 min，10% A;10～10.01 min，10% A→90% A;10.01～13 min，90% A。流速1 mL/min;進樣量5 μL;柱溫40 ℃。

2）質譜條件。電噴霧離子源（ESI）;正離子掃描;多反應監測（MRM）;毛細管電壓：5 500 V;干燥氣溫度500 ℃;Gas1：60 mL/min;Gas2：65 mL/min。

2? 結果與分析

2.1? 質譜條件優化

采用電噴霧離子源，在正離子模式下分別對0.5 μg/mL的12種氨基甲酸酯類標準溶液進行母離子全掃描，確定其分子離子。再分別以以上離子作為母離子進行子離子掃描，篩選響應值較高、干擾較小、穩定的兩個離子作為子離子，峰形較高的離子作為定量離子，并優化DP和CE。各目標化合物優化質譜條件見表1。

2.2? 色譜條件優化

采用梯度洗脫能較好地分離12種目標化合物，總離子流見圖1。通過在流動相中加入適量的甲酸和乙酸銨，不但可以增加分離度，改善峰形，而且可以使氨基甲酸酯類農藥在ESI正離子模式的質譜信號得到增強，提高檢測靈敏度。梯度洗脫條件的優化：經過反復試驗，改變不同時間段流動相中有機相和水相的比例，最終確定了最佳梯度洗脫程序：0～6 min，10%甲醇→90%甲醇;6～10 min，90%甲醇;10～10.01 min，90%甲醇→10%甲醇;10.01～13 min，10%甲醇。

2.3? 樣品前處理方法的選擇

以未檢出農藥殘留的蔬菜為基質，添加0.05 mg/kg氨基甲酸酯類混合標準農藥，分別采用NY/T 761-2008[17]中氨基甲酸酯類農藥多殘留測定的前處理方法和QuEchERs前處理方法進行加標回收試驗，兩種方法處理后12種農藥的回收率見表2。其中回收率100%，表示樣品中所含農藥在檢測過程中無損失，結果越接近100%，則前處理方法越好。結果表明，QuEchERs前處理方法簡單、快捷、安全，除多菌靈、嘧霉胺和涕滅威亞砜回收率與761方法接近，其他9種農藥的回收率均優于761方法，且QuEchERs方法所得回收率的相對標準偏差均低于761方法，平行性更好，可作為測定12種氨基甲酸酯類農藥殘留測定的前處理方法。

2.4? 標準曲線和檢出限

將混合標準貯備液分別稀釋成不同濃度的標準液，按上述操作條件進行測定，以濃度對相應的峰面積進行線性回歸，獲得氨基甲酸酯類農藥的標準曲線及相關系數。12種農藥的線性范圍、線性方程和相關系數見表3。標準曲線在線性范圍內呈良好的線性關系，線性相關系數為0.996 6～0.999 9，線性范圍為5～100 μg/L，使用該儀器的方法檢出限為0.1 μg/kg，表明該方法可對氨基甲酸酯類農藥進行準確定性、定量分析。

2.5? 回收率和精確度

取10.0 g未檢出農藥殘留的蔬菜為空白樣品，在線性范圍內分別添加高、中、低3個濃度的標準氨基甲酸酯類農藥按“1.3”方法提取后進行回收率試驗。每個添加濃度重復3次，結果見表4。由表4可以看出，方法回收率為80%～127%，標準偏差為1.1%～10.2%，滿足農藥多殘留分析的要求。