Th1與Th2細胞因子及血管內皮生長因子聯合檢測對肺癌患者發生發展及臨床診斷價值分析

王洪建 ，劉小慧 ，劉燕飛 ，李智全 ，張子弋 ，牛新清

（1.濮陽市人民醫院血液病研究所，河南 濮陽 457000 2.新鄉醫學院醫學檢驗學院，河南 新鄉 453000）

相關數據表示[1]，我國中年男性因癌癥死亡的人數高達約150萬，其中因肺癌死亡占死亡人數的約35.0%，女性患者死亡約到80萬，因肺癌死亡的比例約為25.0%。由以上數據可見肺癌對我國人群健康危害極大。相關資料表示[2]，機體中的主要效應細胞為CD4+T淋巴細胞，分為Th1和Th2兩種，Th1主要分泌IL-2、IFN-γ或TNF-β等細胞因子輔助細胞免疫，Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-6或IL-10等細胞因子輔助體液免疫[3]。相關研究表示[4]，VEGF在腫瘤的表達中和其轉移和生長有一定的相關性。本研究將對以上幾種指標進行聯合檢測，探究Th1與Th2細胞因子及VEGF聯合檢測在肺癌患者病情發生發展中的臨床應用價值。報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 入組患者均為2017年6月至2018年6月之間，在我院治療的肺癌患者114例，男65例，女 49 例，年齡 27-76 歲，平均（50.41±26.06）歲，設為觀察組，均經過我院病理活檢和基因檢測確診為肺癌，其中有腺癌55例，鱗癌44例，小細胞癌10例，其余5例為其它類型肺癌（肺泡細胞癌、大細胞癌），根據美國國立綜合癌癥的分級標準，將本研究標本分為I/II級共50例，III/IV級共64例。將相同時間在我院體檢的健康者作為對照組，共92例，男 51，女41例，年齡 24~76歲，平均（47.89±25.00）歲。 見表 1。

表1 兩組患者一般資料對比情況

1.2 病例組入選標準與排除標準 入選標準：病例組標本均經過我院病理活檢和基因檢測確診為肺癌患者；患者有明確的病理分型以及臨床分期；患者未接受過相關的免疫治療史。排除標準：排除伴有肺部嚴重疾病感染和肺結核的患者。

1.3 研究方法

1.3.1 實驗儀器和試劑 CBA細胞因子檢測試劑盒 （購于美國BD生物科技有限公司）、BECKMANCOULTER-NAVIOS流式細胞儀（購于河南省萊福茵生命科學有限公司）、低溫離心機、漩渦混勻器、移液器、微量精密加樣器。

1.3.2 實驗原理 CBA方法[5]是指一系列具有相同熒光素不同熒光強度的微球組合,微球大小體積相同,在相同熒光強度的微球上包被有適合于檢測各種細胞因子的特異性抗體。同理，在其他熒光強度的微球上包被有其他不同的特異性抗體，將包被有不同抗體的微球混合在一起加入到測試樣本中，使細胞溶解，各種蛋白或細胞內成分釋放出來到懸浮溶液中，被捕獲微球捕獲，就可以利用CBA方法進行多種細胞因子的檢測。

1.3.3 實驗操作 血漿準備：EDTA-K2抗凝管2毫升全血標本。標準曲線制備：建立系列細胞因子標準品溶液，用定量稀釋液稀釋相關標準品。微球準備：各試管全血10μl加破膜劑5μl混合室溫靜置15min，加捕獲微球 5μl混合室溫暗視野靜置10min，轉移混合的微球懸液到各個流式測定管中。加藻紅蛋白（PE）檢測試劑5μl于檢測管，室溫避光孵育3h。用流式細胞分析液洗滌樣本，離心，棄去廢液。加分析液500μl震蕩混勻，立即上機檢測。

1.4 觀察指標 觀察標準：⑴統計兩組患者細胞中的Th1型和Th2型細胞因子和血清中VEGF的表達情況。⑵統計觀察組患者的不同臨床特征中細胞因子的表達差異性，其中包括年齡、病理分型、臨床分期等。⑶觀察肺癌患者血漿中的細胞因子和腫瘤標志物的相關性。

1.5 統計學方法 利用SPSS20.0軟件對兩組細胞因子和腫瘤標志物的表達情況進行統計分析，若兩組相關指標表達情況均符合正態分布,則進行統計描述，兩組間對比則應用t檢驗；若兩組相關指標表達情況不符合正態分布，則用中位數±四分位間距進行統計描述，組間比較利用秩和檢驗。利用方差分析對觀察組細胞因子不同分型組間進行比較。應用person相關法來檢測細胞因子和腫瘤標志物的相關性,若P<0.05認為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者血漿中相關因子表達水平 Th1型中,觀察組血漿中的IFN-γ、IFN-a濃度均顯著高于對照組（t=9.224、7.887，P=0.001、0.031）,觀察組患者的血漿中IL-2表達水平顯著低于對照組 （t=-12.524，P=0.000）， 組間差別具有統計學意義 （P<0.05）；而兩組患者血漿中的IL-12P40表達情況差別不顯著，無統計學意義（P>0.05）；Th2型中，觀察組患者血漿中的IL-6、IL-8以及IL-10的表達水平均顯著高于對照組 （t=8.206、15.263、7.718，P=0.023、0.000、0.027）， 觀察組患者血漿中的 VEGF濃度顯著低于對照組（t=-8.110，P=0.009），組間差別具有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.2 觀察組患者的不同臨床特征中細胞因子的表達差異性 男性肺癌患者的VEGF濃度顯著高于女性患者（t=18.001，P=0.000），差別具有統計學意義（P<0.05）；Th1、Th2 型細胞因子以及 VEGF 在不同年齡段的患者血漿表達差別不大（P>0.05）；臨床III/IV期患者血漿中的IL-8表達水平顯著低于I/II期表達水平（t=9.546，P=0.001），差別具有統計學意義（P<0.05），其余細胞因子在病情不同程度的分期上差別不大（P>0.05）。見表3。

2.3 肺癌患者血漿細胞因子和腫瘤標志物的相關性 肺癌患者中，IFN-γ的表達和NSE、糖類抗原CA125以及腫瘤特異生長因子呈正相關，相關系數分別為 （r=0.164、0.156、0.189，P=0.039、0.032、0.021）；IL-6 濃度越高，NSE、CA125 以及腫瘤特異生長因子水平也越高,其關系為正相關，系數為（r=0.266、0.244、0.400，P<0.001）；IL-8 的表達 NSE、糖類抗原CA125以及腫瘤特異生長因子呈正相關，相關系數分別為（r=0.302、0.299、0.342，P<0.001）；IL-10的表達和糖類抗原CA125呈正相關，相關系數為（r=0.192，P<0.001）；VEGF 和腫瘤特異生長因子為正相關，系數（r=0.287，P=0.001）。 見表 4。

表2 兩組患者血漿中相關因子表達水平（，n）

表2 兩組患者血漿中相關因子表達水平（，n）

組別 例數IL-2 Th1型IFN-γ IFN-a IL-12 IL-6 Th2型IL-8 IL-10VEGF觀察組對照組t值P值114 92 2.65±0.80 6.93±4.20-12.524＜0.001 5.52±1.82 2.50±1.90 9.224 0.001 10.52±9.20 7.01±3.21 7.887 0.031 4.03±2.95 3.95±0.84 2.084 0.712 4.36±1.52 2.84±1.23 8.206 0.023 13.20±3.20 2.23±1.02 15.263＜0.001 3.85±0.74 2.01±0.05 7.718 0.027 123.62±28.63 259.6±100.21-8.110 0.009

3 討論

雖然目前醫學領域對肺癌治療[6]的進展已經非常之大，其中主要為手術治療、放化療等，但是肺癌患者的預后仍然不理想，5年后生存率極低[7]，極大的威脅著人類的健康。相關研究表示[8]，機體內的免疫功能失調會在非小細胞癌的發展過程中出現一定的作用。機體中的主要效應細胞為CD4+T淋巴細胞，分為Th1和Th2兩種，Th1主要分泌IL-2、IFN-γ或TNF-β等細胞因子，Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-6 或 IL-10 等細胞因子[9]。 一般情況下兩種細胞因子會維持著整個機體的相對平衡，兩者相互調節對方的活動和發展方向,但是兩者若出現失衡，體積的免疫功能也隨著出現失調，嚴重時會引起腫瘤的發生。相關文獻報道[10]：聯合檢查非小細胞癌患者的血漿中IL-4和IL-10的濃度要遠遠高于健康者,而Th1型的IL-2、IL-12等因子均顯著低于正常人,足以說明Th1和Th2的失衡和腫瘤的發生發展相關。

表3 觀察組患者的不同臨床特征中細胞因子的表達差異性（，n）

表3 觀察組患者的不同臨床特征中細胞因子的表達差異性（，n）

注：組間進行比較，*P<0.05。

項目 IL-2 IFN-γ IFN-a IL-12P40性別男女年齡分期分型≥60歲＜60歲I/II期III/IV期腺癌鱗癌小細胞癌其他2.55±0.87 2.60±0.84 2.50±0.78 2.61±0.80 2.75±0.86 2.69±0.84 2.69±0.94 2.46±1.03 2.74±1.30 2.56±1.14 3.26±7.12 3.50±7.09 3.74±2.63 3.23±2.95 5.01±3.32 5.85±3.98 5.69±3.36 6.03±4.02 6.23±4.12 6.51±4.09 11.63±10.20 10.89±10.03 10.80±7.20 10.21±7.69 9.32±8.69 10.49±9.25 10.69±9.17 11.62±10.63 10.32±9.85 11.03±9.01 3.98±3.79 4.16±3.54 4.30±2.96 4.52±3.16 5.48±2.96 4.09±3.02 4.30±2.99 4.58±3.69 4.65±3.62 3.98±2.47 IL-6 IL-8 IL-10 VEGF 2.96±2.65 2.89±2.24 2.87±1.03 2.93±1.56 2.98±0.74 2.93±0.84 2.98±0.96 3.02±0.99 3.23±1.03 2.80±0.89 14.95±3.26 12.98±3.62 11.36±3.14 12.20±3.26 2.96±2.15*15.36±4.85*7.69±4.63 8.03±4.50 7.78±4.47 7.59±4.09 2.78±1.75 2.71±1.80 2.79±1.96 2.74±1.74 3.05±2.03 2.63±1.79 2.78±1.78 2.72±2.01 2.79±1.89 2.65±1.87 622.59±321.47*225.19±192.52*302.25±250.47 299.16±248.14 400.63±295.63 398.59±277.41 512.63±253.64 520.14±245.26 513.67±250.69 505.75±239.89

表4 肺癌患者血漿細胞因子和腫瘤標志物的相關性

血管內皮生長因子(VEGF)，是血管內皮細胞特異性結合生長因子，是一種“保守型”的二聚體糖蛋白，與很多疾病的診治息息相關[11]。其具有以下功能：1.刺激血管內皮細胞的增殖；2.導致病理性血管生成；3.最強的血管滲透劑[12-13]。

段民新[14]等研究發現，肺癌患者的IL-12水平較健康患者顯著降低（P<0.05）；張霞琴[15]等指出,肺癌患者外周血的中TNF-a濃度相對于健康人來說較高,而進展期的肺癌患者的TNF-a濃度更高。穆贏海[16]證實了，高表達水平的IL-6和非小細胞癌患者的不良預后有一定的相關性，病情晚期的患者，其血清中的IL-6濃度顯著升高,本研究與之相似。本研究可以看出Th1型中，觀察組血漿中的IFN-γ、IFN-a 濃度均顯著高于對照組 （P＜0.0 5），而觀察組血漿中IL-2表達水平顯著低于對照組組間（P＜0.05）；Th2 型中，觀察組患者血漿中的 IL-6、IL-8以及IL-10濃度均高于對照組，肺癌患者血漿中的VEGF濃度顯著低于健康人，組間差別具有統計學意義 （P＜0.05）；男性肺癌患者的VE GF濃度顯著高于女性患者（t=18.001，P=0.000），說明了肺癌患者內存在著Th1型細胞因子向Th2型細胞因子漂移的現象,由此證實了肺癌患者機體內的兩種細胞因子出現失衡,和肺癌的發生發展具有密切關系。而觀察組患者血漿中的VEGF表達水平顯著低于對照組（P＜0.05），其相關文獻結果有所差別[17]。表2中可以看出男性肺癌患者的VEGF濃度顯著高于女性患者（t=18.001，P=0.000），臨床 III/IV期患者血漿中的IL-8表達水平顯著低于I/II期表達水平（t=9.546，P=0.001），其余細胞因子在病情不同程度的分期上差別不大（P＞0.05），進一步證實了Th1向Th2漂移的程度和臨床分期具有相關性（P＜0.05），和其余臨床特征無明顯相關性。表3中可以看出 IFN-γ 、IL-6、IL-8分別與 NSE、CA125以及腫瘤特異生長因子呈正相關；IL-10的濃度越高，CA125水平也越高,兩者呈正相關；VEGF的表達和腫瘤特異生長因子呈正相關,提示了聯合檢測相關細胞因子和腫瘤標志物,能夠有效的提高對肺癌患者的診斷、預后評估等方面的準確率。

綜上所述，研究通過聯合檢查患者機體的細胞因子和常見腫瘤標志物,同時分析了兩者之間的相關性,可以有效的了解機體內免疫系統的情況,并且有可能為肺癌的免疫治療提供有益的治療方案。