腦脊液細胞染色分類在有核細胞計數偏低時的臨床價值

溫小梅，林有東

（福建省立醫院檢驗科，福建 福州350001）

腦脊液細胞染色分類法是目前檢測腦脊液細胞的金標準,可診斷和鑒別診斷中樞神經系統感染性疾病、腦血管病、中樞神經系統原發性腫瘤、轉移性腫瘤、白血病和淋巴瘤腦膜轉移等[1-4]。目前臨床上腦脊液細胞分類大部分醫院還采用顯微鏡分類法，即通過冰醋酸的作用下，在高倍鏡下根據細胞形狀和細胞核的形態進行分類,共計數100個有核細胞，分別計算單個核和多個核所占比例，以百分數表示。《全國臨床檢驗操作規程》腦脊液常規中提到如直接分類法不易區分細胞或臨床需要分類結果時才進行細胞染色分類[5]；《臨床檢驗基礎》第5版提到白細胞計數<30×106/L可不做分類計數,且未強調一定需要細胞染色分類[6]。亦有文獻報道細胞染色分類形態學檢查具有很重要的臨床意義[7，8]。但是，我們在平時的工作實踐中發現,有核細胞計數偏低時還是需要對其進行細胞染色分類,仍具有極其重要的臨床價值。

因此，本文通過前瞻性地收集113例腦脊液有核細胞總數計數<20×106/L的標本，進行離心染色分類，探討腦脊液有核細胞偏低的細胞染色分類對臨床的參考價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象 選取福建省立醫院2016年6月至2018年10月期間住院采集的有核細胞計數均在20×106/L以下的腦脊液標本113例。同步通過住院信息系統收集患者的臨床病例資料，通過LIS系統收集同一份腦脊液標本的葡萄糖、氯化物、血清腺苷脫氨酶（ADA）和總蛋白等生化檢驗結果。

1.2 實驗方法 腦脊液標本采集2管，每管2ml送至檢驗科后2h內完成細胞染色分類和生化檢查。首先于Sysmex XE-5000儀器在體液模式下進行細胞計數，然后再充入牛鮑氏計數板，由兩位主管技師職稱以上的檢驗師，在Olympus CX23顯微鏡下進行人工核對有核細胞數,選擇有核細胞數<20×106/L，紅細胞數<5×106/L的標本，吸出300μl至Thermo細胞涂片離心機 （Cytospin4）進行1000r/min離心3min,收集細胞于玻片上，用珠海貝索生物技術有限公司生產的瑞氏－姬姆薩染液A和B染色10min（根據本實驗室SOP文件操作）,用Olympus CX23進行分類100個有核細胞。同一患者的另一管腦脊液標本3000r/min離心5min后按標準操作規程用貝克曼DXC800檢測，2h內完成。

1.3 統計學處理 數據處理使用SPSS17.0統計軟件進行分析。各組患者百分率之間采用卡方檢驗或者FISH精確檢驗，生化結果用單向方差分析。兩側P<0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 病人基本特征 腦脊液有核細胞計數<20×106/L的113例患者均已確診,見表1。

表1 病人基本特征

2.2 常見細胞染色分類情況和細胞形態 細胞染色后分類發現17例異常細胞，其中最常見的是轉移癌細胞，胃癌轉移細胞有5例，占29.4%（5/17），肺癌轉移細胞4例，占23.5（4/17）；其次為淋巴瘤細胞3例，占17.6（3/17）。常見的轉移性癌細胞、淋巴瘤細胞和腦膜白血病細胞形態見圖1。113例患者中，淋巴細胞分類升高(>80%)有34例；單核細胞升高（>45%）有18例，1例出現嗜酸性粒細胞升高（>5%）。 見表 2。

2.3 細胞染色分類法與影像學檢查 實體惡性腫瘤、淋巴瘤和白血病患者做細胞染色分類檢查檢出異常細胞的陽性率均高于相近時間段的頭顱CT/MRI檢查。特別是對于實體惡性腫瘤，細胞染色分類檢查檢出異常細胞的陽性率為71.4%（10/14）明顯高于CT/MRI檢查發現占位性病變的陽性率21.4%（3/14）,兩種檢查方法有顯著統計學意義（P=0.021）。 見表 3。

不同臨床診斷患者之間葡萄糖、氯化物、ADA和總蛋白等生化檢驗結果均無統計學意義。

4 討論

表2 細胞染色分類異常結果

圖1 常見的轉移性癌細胞、淋巴瘤細胞和腦膜白血病細胞

表3 細胞染色分類法與影像學檢查

腦脊液的細胞形態學在臨床中樞神經系統疾病診斷和治療監測上具有重要意義。隨著臨床檢驗技術的飛速發展,雖然目前腦脊液檢查有流式細胞分析技術、PCR基因擴增技術和原位熒光等的應用[9-14],但細胞形態學簡單快速,成本價格低，而且結果直觀,因此腦脊液的細胞染色分類法仍然作為中樞神經系統疾病包括轉移癌、隱球菌感染、淋巴瘤和白血病等主要的檢查手段[15-17]。如前所述《全國臨床檢驗操作規程》腦脊液常規中提到如直接分類法不易區分細胞或臨床需要分類結果時才進行細胞染色分類[5]，因此在實際檢驗操作中,本科室的標準操作規程（SOP）以及大多數福建省級醫院檢驗科均以細胞計數＜20×106/L作為不再染色分類的標準,但本研究發現假如按操作規程檢驗的話，113例患者中至少漏診17例患者,包括轉移性胃癌、轉移性肺癌、淋巴瘤和中樞神經系統白血病。因此腦脊液細胞計數＜20×106/L，細胞染色分類仍然非常必要,對于中樞神經系統病變早期診斷具有十分重要的意義,特別是懷疑腦膜轉移癌患者。以往較多文獻報道腦脊液腦膜癌檢出率一般為1%左右,本研究納入的標本是有核細胞＜20×106/L的腦脊液標本，檢出陽性率為10.6%（12/113）,我們分析了陽性率差異原因，標本入選標準只有一條即有核細胞計數小于20×106/L的所有送檢的腦脊液標本，因此不存在選擇性偏倚。陽性率差異原因可能有如下兩個：一是113例入選患者中有64例有頭暈頭痛，是否因為臨床癥狀已出現導致陽性率高；二是本研究使用性能較好的Thermo細胞涂片離心機,再加上有高年資的檢驗技師復核結果可能降低了漏檢率。陽性率差異原因需在后續研究中進一步探討。

有學者報道34例腦膜癌患者中32例腦脊液檢出惡性腫瘤細胞,而CT/MRI檢查僅有23例出現腦膜損傷腦水腫等各種非特異性的影像學改變[18]。與以往的研究報道類似,本研究亦發現，腦脊液有核細胞計數＜20×106/L的患者細胞染色分類法對實體惡性腫瘤腦轉移、淋巴瘤腦轉移和中樞神經系統白血病陽性檢出率均高于CT/MRI檢查，腦脊液細胞染色分類法對這類疾病的診斷準確性可能優于影像學檢查。因此，對于懷疑這類疾病患者,腦脊液細胞染色分類法是非常重要的早期診斷手段。當然,后續研究進一步增加研究的樣本量是非常必要的。

綜上所述,腦脊液的細胞形態學檢查無論細胞計數多少均需要進行細胞染色分類,特別是對于懷疑轉移性癌、淋巴瘤侵犯中樞和中樞神經系統白血病患者,而且細胞染色分類檢查早期診斷作用可能優于CT/MRI檢查。