IL-28B基因rs12979860基因多態性與慢性丙型肝炎轉歸的關系

蔡博 劉曉丹 王小青

據世衛組織報道，全球丙型肝炎感染者占比約為3%，慢性感染者高達1.7億，其中自發性清除者約為20%～30%，持續感染者約為70%～80%[1]。若未能及時治療，在持續病毒感染的情況下極易進展為肝硬化，甚至引起肝細胞癌，增加死亡率。IL-28B以IFN-λ3為表達產物，它能將JAK-STAT通路激活，并調節機體免疫。近年來，研究發現IL-28B基因多態性可能與慢性丙型肝炎(CHC)自發清除效果存在關聯，但其與肝功能、脂代謝轉歸的關系尚未明確[2]。本研究旨在分析IL-28B基因rs12979860位點多態性與CHC轉歸的關系，為該病治療提供新的治療方向，現報道如下。

資料與方法

一、一般資料

選取山東省聊城市第二人民醫院2014年8月—2017年8月收治的CHC患者130例，均給予抗病毒治療。其中男69例，女61例，年齡30～72歲，平均(49.76±14.39)歲；體質指數18～25 kg/m2，平均(21.32±2.14)kg/m2；病程2～7年，平均(4.34±1.32)年；家族史：有26例，無104例；HCV基因型：Ib型118例，非Ib型12例；飲酒史：有41例，無89例。研究方案獲得本院倫理委員會批準。

二、診斷標準[3]

(1)有CHC癥狀體征，包括惡心、腹脹、發熱、黃疸等；(2)HCV陽性≥6個月；(3)HCV RNA呈陽性；(4)血清檢查提示谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)增高。

三、納入與排除標準

(1)納入標準 ①臨床診斷明確；②接受12個月的抗病毒干預；③既往無免疫調節劑應用史；④知情同意。

(2)排除標準 ①合并甲亢、惡性腫瘤；②妊娠、哺乳期婦女；③肝硬化；④因酒精、藥物所致肝病；⑤糖尿病；⑥高血壓；⑦精神病史。

四、方法

(1)分組方法 根據患者12個月后的抗病毒療效，分為轉歸良好組、轉歸不良組。評價標準[3]：①轉歸良好：經干擾素等干預12個月，獲得部分病毒學應答或完全應答；②轉歸不良：經干擾素等干預12個月，未能獲得病毒學應答。

(2)基因多態性測定 主要試劑包括PCR引物、瓊脂糖、乙醇、DNA提取試劑盒、探針。主要儀器為離心機、電泳儀、水浴槽、分光光度計、成像系統、移液器、PCR儀。DNA提取：①采集4 mL靜脈血，抗凝；②取20 μL蛋白酶K加入，加200 μL結合液，混勻，水浴(恒溫70℃)10 min，待其顏色變得清亮；③取異丙醇200 μL，混勻，于收集管內置入吸附柱，倒入反應溶液，離心30 s(10 000 rmp)；④棄廢液，取去除液400 μL倒入，離心30 s(12 000 rmp)；⑤再次棄廢液，取漂洗液600 μL倒入，離心30 s(12 000 rmp)；⑥再次棄廢液，下調水浴箱溫度(68 ℃)，加漂洗液500 μL，離心30 s(12 000 rmp)；⑦棄廢液，離心120 min(11 000 rmp)，徹底清除漂洗液；⑧取新的離心管，置入吸附柱，對洗脫緩沖液進行預熱，取50 μ洗脫緩沖液倒入，室溫下等待3 min，離心60 s(12 000 rmp)，將溶液置于吸附柱，反應2 min，離心60 s(10 000 rmp)。

完成DNA提取后，取1 μL樣本行質量鑒定，給予凝膠電泳，并稀釋為5～10 ng/μL。具體如下：①按照所需量對瓊脂糖粉進行稱重，并倒入電泳緩沖液；②將溶液加熱使其完全溶解，時間為2 min，溶液變成透明色；③冷卻，使溶液降至60 ℃，按照1 μL/1 mL比例取溴化乙錠EB加入，混勻；④倒入橡膠膠膜(內含梳子)，觀察梳子齒間、齒下有無氣泡；⑤等待凝固，時間為25～30 min，將梳子撤除，使凝膠入電泳槽；⑥取電泳緩沖液加入，直到其高于膠面1 mm；⑦取樣品2 μL倒至樣品槽；⑧經成像系統進行分析，并獲得圖像。本研究主要分析rs12979860位點，包括TT、CT、CC三種基因型。

(3)血清學測定 在入院當天采集靜脈血4 mL，離心20 min，轉速為3 000 r/min，分離血清，測定血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、總膽紅素(TB)、白蛋白(Alb)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、總膽固醇(TC)水平，儀器為日本東芝TBA-40FR全自動生化分析儀。

五、統計學方法

結 果

一、患者轉歸情況分析

在130例患者中，轉歸良好101例，占77.69%，轉歸不良29例，占22.31%。根據療效分成轉歸良好組、轉歸不良組。

二、rs12979860分型與預后的關系

轉歸良好組CC型90(89.11)例，CT型11(10.89)例，轉歸不良組CC型17(58.62)例，CT型12(41.38)例。轉歸良好組CC型占比高于轉歸不良組(χ2=14.382，P=0.000)，見表1。

三、兩組肝功能、脂代謝比較

轉歸良好組的HDL高于轉歸不良組，其余各指標低于轉歸不良組(P<0.05)，見表1。

四、rs12979860分型與肝功能、脂代謝的關系

據表2得知CC型107例，CT型23例。CC型患者血清HDL高于CT型，其余各指標低于CT型(P<0.05)，見表2。

討 論

本研究發現130例患者經抗病毒干預后，有101例療效良好，且療效良好者的rs12979860位點CC基因型占比高于療效不良者，提示其基因分型可能影響CHC抗病毒療效。rs12979860是IL-28B基因的一個位點，有研究提示IL-28B基因變異對病毒性肝炎療效影響較大，帶有保護性基因的病毒學應答率高于無保護性基因者[4]。然而，既往研究關于IL-28B基因對抗病毒療效的影響機制尚未完全明確。從本研究結果來看，在IL-28B基因位點中，rs12979860位點的CC基因型為保護性基因，具有宿主保護功能。有學者發現該位點的CC基因型能反映肝小葉炎癥程度，它可降低肝細胞脂肪變性風險，對肝臟有保護作用[5]，這為本研究開展提供了理論依據。研究表明在歐裔美洲人中，該位點CC基因型占比約33%，而亞洲人群的該位點CC基因型占比非常高，如日本約為84%，這類患者的預后往往也更為理想[6]。本研究也證實CHC患者rs12979860位點以CC基因型為主，且預后較好。因此，在日后的治療中，醫師可通過測定該位點的基因分型預測預后。

表1 兩組肝功能、脂代謝比較(±s)

表2 rs12979860分型與肝功能、脂代謝的關系(±s)

通過觀察兩組患者的肝功能、脂代謝，發現轉歸良好組的肝功能、脂代謝改善較轉歸不良組更顯著，與既往研究[7]基本相符。本研究創新之處在于分析rs12979860分型與肝功能、脂代謝的關系，發現帶有CC基因型的患者肝功能、脂代謝改善較帶有CT基因型的患者更顯著。研究表明CHC患者肝功能、脂代謝異常可能與機體炎癥反應有關，隨著機體炎癥反應越重，對肝功能損害越重，脂代謝紊亂更難以糾正[8]。另有研究提示rs12979860位點的CC基因型能影響肝臟炎癥程度，在肝臟出現炎癥前，該位點CC基因型便能提前預測，有利于保護肝臟[9]。因此，筆者推測帶有CC基因型的患者可能因對肝臟有保護作用，從而緩解炎癥，更利于改善肝功能與脂代謝。研究表明IFN-λ3作為IL-28B的表達產物，當IL-28B基因多態性改變后，IFN-λ3也會發生相應變化，而IFN-λ3具有調節免疫的作用，且具備抗病毒功能[10]。鑒于此，筆者推測CC基因型對肝臟的保護作用可能與IFN-λ3的免疫調節、抗病毒作用相關。

綜上，IL-28B基因rs12979860位點的基因分型與CHC患者轉歸密切相關，其中帶有CC基因型的患者轉歸更好，它對改善肝功能、脂代謝有益，臨床可據此研究出新的治療方向。此外，本研究也有不足，如僅選取130例樣本，病例數少，未來將擴大樣本量分析其他位點的基因分型情況。