阿克蘇地區牛環形泰勒蟲病分子流行病學調查

李佳　段真真　楊世忠　何宗霖

摘要 ? ?為研究阿克蘇地區牛感染環形泰勒蟲情況，采用實時熒光PCR方法對519份牛血液樣品進行了檢測。結果表明，牛感染環形泰勒蟲病發生率為14.6%，其中舍飼和散養牛感染率分別為12.6%和15.0%，二者差異無統計學意義（χ2=0.17，p>0.05）。由此表明，阿克蘇地區是牛環形泰勒蟲流行地區，有關部門應采取相應的措施，降低發生牛環形泰勒蟲病疫情的風險。

關鍵詞 ? ?環形泰勒蟲;實時熒光PCR;流行病學;調查;新疆阿克蘇

中圖分類號 ? ?S855.9 ? ? ? ? 文獻標識碼 ? ?A

文章編號 ? 1007-5739（2019）19-0219-01 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）

牛環形泰勒蟲病是由泰勒科泰勒屬的環形泰勒蟲（Theileria annulata）寄生于牛紅細胞、巨噬細胞和淋巴細胞內的血液原蟲病，病原主要通過媒介蜱蟲傳播，臨床上主要表現為稽留熱、黃疸、貧血及體表淋巴結腫大等癥狀[1-2]，嚴重時可導致死亡，給養牛業造成嚴重危害。我國自1960年首次發現環形泰勒蟲病以來，相繼在寧夏、河北、甘肅、新疆、內蒙古等地報道了該病的存在[3-4]。牛環形泰勒蟲病長期危害養牛業的發展，感染環形泰勒蟲的牛多呈帶蟲免疫，少有發病。沙塔爾等[5]報道的吐魯番地區牛環形泰勒蟲病感染率為51.6%。養牛業是阿克蘇地區農牧民實現致富增收的重要途徑之一，為了解阿克蘇地區牛感染環形泰勒蟲病情況，為掌握該病的流行狀況及為防治提供數據支持，本試驗對該地區隨機采取的519份抗凝血進行了分子生物學檢測。

1 ? ?材料與方法

1.1 ? ?主要試劑

全血DNA提取試劑盒、Premix Ex Taq、聚合酶等均購自大連寶生物工程有限公司;引物探針由生工生物工程（上海）股份有限公司合成;實時熒光定量7 500 PCR儀購自ABI。

1.2 ? ?試驗方法

1.2.1 ? ?樣品采集。2017—2018年，從阿克蘇地區轄內9個縣（市）隨機采樣，無菌采集519頭?？鼓崛∪蚪MDNA，-20 ℃保存待檢。

1.2.2 ? ?實時熒光PCR檢測。利用已報道的牛環形泰勒蟲的特異性引物和探針[6]，序列如下。TAF：5′-AATTTCTGCTGC-ATTGCTTG-3′。TAR：5′-GTAAACATTCAGACAAAGAAACT-CC-3′。TAP：5′-FAM-CCTCTGGGGTCTGTGCATGTGG-TA-MRA-3′。以提取的519份牛核酸樣品為模板進行實時熒光PCR擴增，擴增體系均為25 μL：Premix Ex Taq 12.5 μL，上、下游引物（10 μmoL）各1 μL，探針（10 μmoL）0.75 μL，模板1 μL，ROX Ⅱ 0.5 μL，ddH2O補至25 μL。反應條件95 ℃預變性2 min;95 ℃變性15 s、57 ℃變性45 s，40個循環，反應最后一步檢測熒光信號。

1.3 ? ?統計學分析

應用SPSS 22.0分析軟件對調查數據進行分析，計算牛感染環形泰勒蟲病情況，采用χ2檢驗比較檢測數據的差異。檢驗水準為α=0.05。

2 ? ?結果與分析

2.1 ? ?實時熒光PCR檢測結果

對提取的519份核酸樣品經實時熒光PCR檢測發現，感染率為14.6%（76/519）（圖1）。

2.2 ? ?不同地區牛感染環形泰勒蟲病情況

對阿克蘇地區9個縣（市）隨機采集的519份樣品實時熒光PCR檢測，9個縣（市）檢測結果見表1?？梢钥闯?，各縣（市）牛均有感染環形泰勒蟲病情況，各縣（市）間牛感染環形泰勒蟲病情況差異具有統計學意義（χ2=0.12～41.77，p<0.05）。

2.3 ? ?不同飼養方式牛感染環形泰勒蟲病情況

519份核酸樣品經PCR檢測，不同飼養方式的牛感染環形泰勒蟲病的情況見表2?？梢钥闯?，舍飼和散養條件下的牛均可感染環形泰勒蟲病，二者差異無統計學意義（χ2=0.17，p>0.05）。

3 ? ?討論

目前，基層獸醫部門檢測環形泰勒蟲病主要還是以血液涂片染色鏡檢為主，很少用到分子生物學和免疫學方法，血液涂片染色鏡檢受制于操作人員操作技能、專業知識儲備和染色技術，漏檢、誤檢情況較普遍。分子生物學方法比血液涂片染色鏡檢更靈敏、特異，適合應用于高通量檢測[7]。牛在自然感染下，往往是帶蟲免疫，一旦感染將很難根除[8]。

本次調查結果發現，阿克蘇地區9個縣（市）的牛均有感染牛環形泰勒蟲病的情況，縣（市）之間感染情況差異具有統計學意義（χ2=0.12～41.77，p<0.05），可能是由于各縣（市）地理環境、海拔、氣候不同，導致當地蜱蟲種群數量存在差異所致[9]。不同飼養條件下牛感染環形泰勒蟲病情況差異無統計學意義（χ2=0.17，p>0.05），導致這種結果的原因可能有以下3種：一是舍飼牛場周圍常有放牧羊出沒，牛場圈舍是不完全封閉的，放牧羊身上的蜱蟲掉落后進入牛場圈舍內叮咬舍飼牛;二是牛場圈舍針對性消毒措施不夠完善，散養牛羊混合飼養情況十分普遍，交叉感染情況普遍;三是牛場購入飼草料時將附著在飼草料上的蜱蟲一并帶回。

調查結果表明，阿克蘇地區是牛環形泰勒蟲病的流行地區，對當地養牛業造成了一定的影響，有關部門應采取相應的措施，降低發生牛環形泰勒蟲病疫情的風險。

4 ? ?參考文獻

[1] 胡詩悅，錢年超，王軼男，等.延邊地區牛瑟氏泰勒蟲病的分子流行病學調查[J].中國獸醫科學，2012，42（6）：647-650.

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[3] 姜東續，李娟，呂敏娜，等.廣東省牛體寄生蜱種及攜帶病原情況調查[J].畜牧與獸醫，2015，47（2）：95-98.

[4] 海尼木古力·艾合買提，謝小婉，米熱古麗·塔西鐵木爾，等.新疆托克遜部分地區牛環形泰勒蟲感染情況調查[J].畜牧與獸醫，2017，49（6）：117-118.

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[7] 陳秋語，羅金，陳澤，等.新疆伊犁哈薩克自治州蜱及牛羊蜱傳病分子流行病學調查[J].中國動物傳染病學報，2016，24（3）：72-77.

[8] 李佳，段真真，白正輝，等.阿克蘇地區羊感染泰勒蟲病流行病學調查及分類鑒定[J].黑龍江畜牧獸醫，2016（11）：165-167.

[9] 圖爾蓀·薩迪爾，李佳，王振寶，等.新疆昭蘇縣馬梨形蟲的檢測及傳播媒介蜱的鑒定[J].動物醫學進展，2016，37（7）：44-48.