免疫抑制劑FK506對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、侵襲、遷移能力的影響及作用機(jī)制研究①

姜海波 李 衛(wèi) 姜 霞 裴永彬

(河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院普外三科，石家莊050031)

結(jié)直腸癌是常見的惡性腫瘤之一，可向肝臟、肺、腹膜等臟器轉(zhuǎn)移，結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌患者死亡的重要因素，近年來結(jié)直腸癌化療和分子靶向治療取得了巨大進(jìn)步，但臨床上對(duì)結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的治療并沒有實(shí)質(zhì)性突破[1，2]，因此研究新的抑制結(jié)直腸癌生長及侵襲、轉(zhuǎn)移的藥物對(duì)改善結(jié)直腸癌患者的預(yù)后具有重要意義[3]。FK506為新型免疫抑制劑，在肝移植、腎移植中的應(yīng)用日益成熟[4]，近年來研究發(fā)現(xiàn)FK506對(duì)膀胱癌、肝癌等惡性腫瘤細(xì)胞具有抑制作用[5，6]，但FK506對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞的影響尚不清楚。本文中FK506對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞HCT116的增殖、侵襲、遷移的影響及可能機(jī)制進(jìn)行研究，為結(jié)直腸癌的治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 細(xì)胞株：結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116和SW480購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫。主要試劑：免疫抑制劑FK506、辣根過氧化酶標(biāo)記羊抗兔IgG抗體、鼠抗人Cyclin D1單克隆抗體、鼠抗人MMP2單克隆抗體、鼠抗人MMP9單克隆抗體、β-actin單克隆抗體(美國Sigma公司)，胎牛血清、DMEM培養(yǎng)液、胰蛋白酶等(美國Gibco公司)，BCA蛋白濃度測定試劑盒、細(xì)胞周期分析試劑盒、MTT試劑、Transwell小室、Matrigel等(美國CST公司)。

1.2方法

1.2.1FK506對(duì)HCT116和SW480細(xì)胞增殖的影響 將對(duì)數(shù)生長期的結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116和SW480鋪于96孔板中，用不同濃度FK506(10、50、100、200、400 μg/L)處理HCT116和SW480細(xì)胞，對(duì)照組不用FK506處理，每個(gè)藥物濃度處理組設(shè)7個(gè)復(fù)孔，加入藥物孵育24 h后，每孔加入20 μl MTT溶液(5 g/L)繼續(xù)培養(yǎng)4 h，移除MTT試劑后，再加入DMSO振蕩10 min，用酶標(biāo)儀在波長490 nm處測定吸光度值，計(jì)算HCT116和SW480細(xì)胞增殖抑制率，增殖抑制率=1-(實(shí)驗(yàn)孔吸光度值-空白孔吸光度值)/(對(duì)照孔吸光度值-空白孔吸光度值)。……