miR-21靶向調控Bcl-2對腸道上皮HT29細胞凋亡的影響及機制研究①

王衛衛 邢文韜 魏思忱 高巧營 魏新亮 石 亮 孔 郁

(滄州市中心醫院消化內二科，滄州061001)

潰瘍性結腸炎是炎癥性腸道疾病的主要類型之一，可引起人體過度免疫應答，導致炎癥細胞因子大量產生，誘發腸道上皮細胞凋亡，臨床表現為直腸出血和嚴重腹瀉[1]。該病經柳氮磺胺吡啶水楊酸制劑治療后仍易復發，嚴重者甚至進行手術切除[2]。潰瘍性結腸炎難以根治且發病率逐年遞增[3]，而至今對其發病機制及致病因素仍不清楚，因此研究其發病機制顯得尤為迫切，更有助于尋找根治潰瘍性結腸炎的有效方法。研究表明，某些微小型RNA(microRNA，miRNA)在潰瘍性結腸炎組織中異常表達，miR-21是高度表達的miRNA之一[4]。在結腸腺癌細胞Caco-2細胞中，過表達的miR-21通過靶向Rho GTP酶RhoB破壞腸上皮屏障功能[5]。據報道，在胰島β細胞中，過表達的miR-21可抑制B細胞淋巴瘤/白血病基因-2(B-cell lymphoma/leukemia gene-2,Bcl-2)轉錄和表達，并誘導細胞凋亡發生[6]。Bcl-2是一種抗凋亡因子，在多種癌癥中表達上調[7,8]。目前在潰瘍性結腸炎中還沒有關于miR-21與Bcl-2關系的研究，因此本文通過下調miR-21，探究在人腸上皮HT29細胞中miR-21對Bcl-2的作用機制和對細胞凋亡的影響，揭示潰瘍性結腸炎的發病機理，為該病臨床治療提供理論依據。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑 Trizol、Lipidosome 2000購自美國Invitrogen公司。實時定量PCR試劑盒、逆轉錄試劑盒購自美國Thermo Fisher公司。外源性TNF-α購自美國PeproTech公司。miR-21 inhibitor、miR-21mimic和Bcl-2 siRNA(si-Bcl-2)購自上海吉瑪生物科技公司。RPMI1640培養液、胎牛血清(FBS)購自美國Gibco公司。RIPA裂解液購自北京索萊寶生物公司。BCA試劑盒購自廣州永諾生物科技有限公司。……