CRISPR/Cas9建立IL-12p35基因敲除大鼠C6細胞系表達研究①

孫 瑾 張俊卿 黃延林 楊芳裕 董桂江 田新華

(廈門大學附屬中山醫院神經外科,廈門361004)

腦膠質瘤是顱內最常見的原發性惡性腫瘤，多種治療膠質瘤傳統方法如手術切除、放療、化療、伽瑪刀，X刀等均不斷改進，但總體治療效果仍不理想，大部分膠質母細胞瘤患者在2年內死亡[1-3]。細胞因子免疫調節治療作為一種新興的治療手段，已在動物和臨床實驗中證實對肺癌、肝癌、淋巴癌等腫瘤有一定療效[4]，因此，也為腦膠質瘤的治療提供了新的方向。在這些細胞因子中,IL-12的研究目前比較全面[5]，IL-12不僅具有在一系列病理、生理變化過程中促進TH1細胞增殖、分化、活化功能，還有促進NK細胞增殖、分化的作用。人體內IL-12可以增加機體抵抗細菌、寄生蟲等外來生物侵襲的能力，能促進抗腫瘤免疫，增強機體抗病毒效應。所有功能都與其結構及分子形態緊密相關，IL-12具有約70 kD的異二聚體細胞因子的結構，兩條多肽鏈分別是40 kD(p40)和35 kD(p35)，編碼兩條鏈的基因位于兩條不同染色體，具有互不相同調節機制。p40基因存在于單核細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞等細胞中表達，p35基因分布則廣泛的多，在不同類型的細胞和組織中都有表達，但目前不同亞基IL-12p35的直接作用知之甚少，仍需進一步研究探索。

CRISPR/Cas9自發現之后廣泛應用在生物系統和疾病研究中[6]，它是一個簡單并且可靠的基因組編輯工具，利用CRISPR/Cas9敲除癌細胞的特定基因，通過檢測細胞生物學特性的改變，能夠判斷該基因對腫瘤的作用，這一方法也被用在腦膠質瘤細胞系的研究中[7]。……