腦梗死患者血小板糖膜蛋白Ⅱb基因多態性觀察

王寧寧，金銘，武楠，邱長春,2

(1齊齊哈爾醫學院，黑龍江齊齊哈爾 161006；2中國醫學科學院基礎醫學研究所)

腦梗死近年已發展成為常見病，血小板聚集是其發病機制中的重要組成部分。血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(GPⅡb/Ⅲa)為血小板上的一類受體，可結合血管性血友病因子(vWF)、纖維蛋白原等多種黏附蛋白，是各種因素所致血小板黏附與聚集的最終共同通路，并通過與P2Y12受體耦聯，接到P2Y12受體拮抗劑而發揮藥理作用[1]。已有研究[2,3]報道，GPⅡb/Ⅲa的編碼基因[血小板糖膜蛋白Ⅱb基因(ITGA2B基因)/ITGA3]遺傳多態性與缺血性腦梗死的發病風險相關，但在中國人群中的研究較少，尤其是針對ITGA2B的研究更為鮮見。黑龍江省地處高緯度區域，氣溫偏低，冬季時間長成為該地區的一大特點，同時本地區居民長期高鹽飲食，使該地區腦梗死患病率居于中國之首[4]。但是在黑龍江省地區選取腦梗死患者，并針對ITGA2B基因與腦梗死相關性的研究尚未發現。本研究收集了384例腦梗死患者的臨床資料，并探討其ITGA2B基因多態性與腦梗死發病的關聯性，以期進一步完善腦梗死發病機制，為腦梗死的基因診斷和針對不同基因型進行有針對性的治療提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取齊齊哈爾醫學院第二附屬醫院收治的腦梗死患者384例，男201例，女183例；年齡(61.24±8.89)歲。納入標準：所有患者均經腦部CT或MRI確診，并無腦血管病變；排除標準：患有嚴重肝腎疾病等嚴重器質性病變或傳染病而無法參與研究的患者均予以排除。另選與齊齊哈爾市處于同一緯度的漠河市北極鎮健康體檢無腦卒中健康居民384例(對照組)，男194例，女190例；年齡(55.82±8.98)歲。所有參與者均無神經系統的癥狀及體征。本研究經齊齊哈爾醫學院醫學倫理委員會批準，所有對象均簽署知情同意書。

1.2 ITGA2B基因的標簽位點篩選及檢測 在GeneBank中查找ITGA2B基因區間，42449550-42466874，上下游各擴大2 kb后，為42447550-42468874，下載文件序列后，用Hapview進行設置標簽SNP，最終選取標簽位點8個，分別為rs5910、rs850733、rs850731、rs853730、rs850728、rs11780452、rs850735、rs55541425。從腦梗死患者和對照組人群的血樣中，利用DNA提取試劑盒(北京康為世紀生物科技有限公司)提取DNA，通過SpectroChip 11-G384芯片技術檢測已篩選出的SNP位點，計算各基因型的頻數，進一步采用統計學方法對比組間ITGA2B基因多態性的差異。

1.3 統計學方法 采用SPSS20.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗，以例數(百分比)表示；群體基因型用Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗；并采用二元Logistic回歸計算不同基因型和等位基因的危險性。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組rs850730和rs11780452基因型、等位基因頻率比較 每個DNA分別檢測了8個位點，即rs5910、rs850733、rs850731、rs853730、rs850728、rs11780452、rs850735、rs55541425。SNP位點rs55541425僅有一種基因型AA予以刪除；進一步經Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗發現，rs850733、rs850731、rs850735不符合遺傳平衡；經連鎖不平衡分析，rs5910與rs850730完全連鎖平衡，rs5910為同義突變，所以本次研究重點探討rs850730和rs11780452與腦梗死的關聯。rs850730有19例未檢出，檢出率為97.53%；rs11780452有17例未檢出，檢出率為97.79%；其中兩位點均未檢出的有8人。刪除未檢出的參與者后，共有740例樣本(對照組379人，觀察組361人)在本研究中參與進一步的分析，整體有效率為96.35%。

rs850730基因型、等位基因頻率比較見表1,rs11780452基因型、等位基因頻率比較見表2，由表1、2可知，兩組rs850730和rs11780452基因型、等位基因頻率比較均無統計學差異(P均>0.05)。

表1 rs850730基因型、等位基因頻率

表2 rs11780452基因型、等位基因頻率

2.2 兩組不同年齡段rs850730和rs11780452基因型、等位基因頻率比較 兩組不同年齡段rs850730基因型、等位基因頻率比較見表3，兩組不同年齡段rs11780452基因型、等位基因頻率比較見表4，由表3、4可知，非老年人中位點rs850730的AG基因型和等位基因A均增加了腦梗死的危險性，OR(95%CI)=1.819(1.136，2.913)和1.324(1.012，1.733)；計算該位點的顯性模型，結果顯示腦梗死發病危險性顯著增加，OR(95%CI)=1.667(1.065，2.611)。

表3 兩組不同年齡段rs850730基因型、等位基因頻率

表4 兩組不同年齡段rs11780452基因型、等位基因頻率

3 討論

缺血性腦卒中是環境和遺傳因素共同作用的產物，具有高發病率、高致殘率的特點[5]。據2015年的報道顯示，全球腦卒中死亡人數630萬人，占總死亡人數的11.8%[6]，其中缺血性腦卒中占60%～80%[7]。隨著生活方式的改變和生活壓力的增加，近年來腦卒中發病率呈現年輕化的趨勢，1990～2010年的20～64歲人群腦卒中發病率增加了25%[8～10]。在我國缺血性腦卒中的危害同樣不容小覷，我國每年新增腦卒中200多萬，死亡約150萬，存活著中50%～60%伴隨著癱瘓、失語等嚴重殘疾乃至失去自理能力[11]。因此，加強腦卒中的病因學研究，刻不容緩。

血小板是溶血系統的重要組成部分，在腦梗死的發病機制中起著關鍵作用。GP Ⅱb/Ⅲa是內膜家族的數量最多的膜蛋白，在血小板活化、聚集和凝固過程中發揮著重要作用。而編碼Ⅱb-Ⅲa復合物的基因為ITGA2B和ITGA3[12]，這兩個基因均位于17號染色體。目前關于ITGA2B和ITGA3與腦梗死發生的關聯性研究，結論并不一致[13～15]。最近的一篇綜述顯示，包含有3 209例患者的11項研究表明ITGA2B和ITGA3與腦梗死發生有關，這些患者絕大多數數白種人；而同時有包含有1 237例患者的9項研究表示與腦梗死無顯著關聯性，這些9項中僅有一項是中國腦梗死患者[16]。2010年Sanja Stankovic等發表的綜述中曾指出在5篇病例對照性研究中，僅有1篇文獻顯示ITGA2B對腦梗死的發生有影響[17]。

年齡是腦梗死發生過程中已知的重要影響因素，根據年齡分為老年人和中青年人，分別進行分析，可以降低年齡因素對結果的影響。伴隨年齡的增長，高血壓、高血脂、糖尿病等多種慢性疾病患病率逐年增加，老年人在慢性疾病長期纏身的狀態下，身體各方面機能逐漸減弱，從而加速了腦梗死的發生，而基因在腦梗死發生過程中的作用被掩蓋。而在中青年人中這方面的影響相對較弱，基因的作用相對增強，所以在中青年人中基因對腦梗死發生的影響足以顯現出來。本研究結果經過對361例腦梗死患者和379例對照組進行比對，未發現ITGA2B與腦梗死之間的顯著關聯；而將年齡分為老年人(≥60歲)和非老年人(<60歲)進一步分層分析，結果顯示在中青年人中，攜帶有rs850730 AG基因型的個體發生腦梗死的危險性是GG基因型攜帶者的1.819倍，rs850730顯性遺傳模型(AG+AA)攜帶者發生腦梗死的危險性是GG基因型攜帶者的1.667倍，既從rs850730位點角度看，ITGA2B基因與腦梗死有顯著統計學關聯；而在老年人中未發現此結論，進一步控制性別、吸煙，飲酒和BMI因素后，仍無統計學差異。該研究結果與國內已有的一篇研究結果相一致，ITGA2B基因多態性會對GPIIb受體的表達與否或表達量產生影響，從而參與腦梗死的發生，所以ITGA2B基因可能是腦梗死發病過程中的一種易感基因[18～21]。

總之，在黑龍江省中青年人中，ITGA2B基因中的rs850730位點與腦梗死有顯著關聯，其顯性遺傳模型(AA+AG)基因型攜帶者發生腦梗死的危險性顯著增加，同時顯性模型中ALT水平顯著升高。因此，在國內進一步深入探討ITGA2B其他位點與腦梗死的關聯性，將有助于腦梗死遺傳發病機制的認識。