尪痹片對骨髓間充質干細胞向成骨細胞分化過程中的成骨標志物的影響研究

劉益臻 李立章 王炎 付坤飛

（貴州中醫藥大學 貴州 貴陽 550001）

尪痹片由著名國醫大師焦樹德教授創立，是國家六類新藥痹病系列藥之一，為中華中醫藥學會風濕病分會協定處方，臨床用于治療類風濕性關節炎（Rheumatoid Arthritis,RA）療效顯著，病理研究和臨床研究均表明該藥可減輕骨破壞程度,促進骨形成[1,2]，骨形成的重要細胞為成骨細胞，骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)可分化為成骨細胞[3]，因此本研究使用尪痹片含藥血清體外干預骨髓間充質干細胞，探討其對成骨分化的保護作用。

1.資料與方法

1.1 藥物與試劑

尪痹片，仙靈骨葆膠囊，甲氨蝶呤片，SD大鼠骨髓間充質干細胞株（中國科學院），成骨分化培養基，茜素紅，腫瘤壞死因子α，TNF-α，一步法快速WB（HRP）試劑盒，高靈敏度化學發光檢測試劑盒，蛋白膜印跡再生液，TRNzol總RNA提取試劑，PrimeScript ? RT reagent Kit with gDNA Eraser，SYBR?Premix Ex Taq ? Ⅱ,ROX plus，DL2,000 DNA Marker，康為世紀SDS-PAGE凝膠制備試劑盒（CW0022），堿性磷酸酶（AKP）測試盒。

1.2 實驗儀器

No：164-5050電 泳 儀，Mini-PROTEAN Tetra Electrophoresis System蛋白電泳槽，Mini Trans-Blot，蛋白轉印系統，TY-80脫色搖床。ZS-2板式酶標儀，202-2AB電熱恒溫箱，ABI7500熒光定量PCR儀，SK-D1807-E Analog 3D Shaker，RS-25S超聲波細胞粉碎機，LIDE 200掃描儀，ST60-4微孔板恒溫振蕩器，AUW-220D電子分析d平。

1.3 含藥血清的制備

清潔級SD大鼠雄性60只（中國人民解放軍第三軍醫大學實驗動物中心，許可證號：SCXK2012-0011），隨機分成6組，每組10只，分別為空白組、尪痹片高劑量組、尪痹片中劑量組、尪痹片低劑量組、仙靈骨葆膠囊組，甲氨蝶呤組，每組10只。尪痹片高劑量組(9630 mg/kg)，尪痹片中劑量組(4815 mg/kg)，尪痹片低劑量組(1070 mg/kg)，仙靈骨葆膠囊組(1320 mg/kg)，甲氨蝶呤組(11mg/kg)，空白組給予生理鹽水2 mL,高劑量是人常規劑量的18倍，中劑量是人常規劑量的9倍，低劑量組、仙靈骨葆組和甲氨蝶呤組均為人常規劑量的5倍，連續給藥10日，每日一次。……