siRNA沉默腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白2表達(dá)對膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲及增殖的影響*

程哲，巢青，王大巍，束漢生

（蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 神經(jīng)外科，安徽 蚌埠 233000）

神經(jīng)膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，具有高病死率、致殘率和復(fù)發(fā)率，其總體生存率和預(yù)后極差[1-2]。腫瘤壞死因子α 誘導(dǎo)蛋白2（tumor necrosis factor alpha induced protein 2, TNFAIP2） 廣泛調(diào)控各項腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)TNFAIP2 rs8126 單核酸多態(tài)性基因變異成為人類食管鱗狀細(xì)胞癌易感因素[3]；TNFAIP2 可以直接靶向調(diào)節(jié)KLF5從而促進乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[4]；鼻咽癌中TNFAIP2 是一種促進細(xì)胞遷移的蛋白質(zhì)，其表達(dá)可作為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)志物[5]。TNFAIP2 在腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲等方面發(fā)揮重要作用，可能成為腫瘤診斷的生物標(biāo)志物和治療靶點。前期研究發(fā)現(xiàn)TNFAIP2 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞及組織標(biāo)本中表達(dá)上調(diào)[6]，然而其對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)功能的影響未見報道，本實驗采用siRNA 技術(shù)沉默膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87 和U251 中TNFAIP2 的表達(dá)，探討TNFAIP2 對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及侵襲功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、U251、U373 和A172，正常人腦星形細(xì)胞株1800 購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫，SHG44 為蘇州大學(xué)附屬醫(yī)院腦神經(jīng)研究所惠贈。細(xì)胞培養(yǎng)液DMEM 和RPMI 1640 購自美國Thermo公司，胎牛血清（fetal bovine serum, FBS）購自美國Gibco 公司，TNFAIP2 及GAPDH 引物和Custom Real-Time PCR Gene Detection Assay 由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司合成，Lipofectamine 2000、Trizol 均購自美國ABI 公司，CCK-8 購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，Matrigel 膠購自美國BD 公司，4%多聚甲醛、DEPC 水 購自北京索萊寶公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87、U373、U251、A172 和SHG44分別用含10% 的FBS 的DMEM 或RPMI 1640 培養(yǎng)基中，于37℃含5%二氧化碳CO2的培養(yǎng)箱 連續(xù)培養(yǎng)，每2～3 天換液，以0.25%胰酶+0.02%乙 二胺四乙酸消化傳代培養(yǎng)，使細(xì)胞維持對數(shù)生長。……