氣相色譜外標法測定飼料添加劑丙二醇(包膜型)含量

趙威 吳月敏 陳凱旋 王效 張倩云 徐二華 盧立志

摘 ?要：為建立氣相色譜外標法測定飼料添加劑丙二醇（包膜型）的含量，本研究采用中國科學院蘭州化學物理研究所色譜中心PEG-20M毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）;柱溫150 ℃，保持6 min;進樣口溫度270 ℃;檢測器溫度280 ℃;檢測器為火焰離子化檢測儀（Flame Ionization Detector，F(xiàn)ID）;載氣為氮氣（N2）;色譜柱流量1.5 mL/min;進樣模式為分流進樣;進樣1 μL，分流比為20∶1進行測定。結(jié)果顯示丙二醇在1 mg/mL～5 mg/mL的檢測濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r2=0.999 6），最低定量限為3.2 μg。該方法操作簡便、靈敏、準確，適用于飼料添加劑產(chǎn)品中丙二醇的含量控制。

關(guān)鍵詞：丙二醇;氣相色譜法;添加劑

中圖分類號：S813.23 文獻標志碼：A 文章編號：1001-0769（2019）08-0073-03

丙二醇是飼料添加劑的一種，近年來逐步在反芻飼料中使用。丙二醇可以通過生糖作用減緩奶牛能量負平衡，從而提高奶牛泌乳性能和改善奶牛健康狀況[1]。由于丙二醇口感較差，直接飼喂會導致動物飼料攝入下降[2]，包膜處理掩蓋了丙二醇帶來的異味，可以解決上述問題。本研究建立了氣相色譜外標法測定飼料添加劑丙二醇（包膜型）含量的方法，為飼料添加劑丙二醇（包膜型）的生產(chǎn)和質(zhì)量評價提供理論依據(jù)。

1 ?儀器與材料

SHIMADZU GC-2030氣相色譜儀[備有火焰離子化檢測儀（Flame Ionization Detector，F(xiàn)ID;簡稱“FID檢測器”]，LabSolutions色譜工作站。

丙二醇對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號190001-201503），樣品為本公司研發(fā)制備的50%包膜丙二醇，批號為18112001、18112002和18112003。

2 ?色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

色譜柱采用中國科學院蘭州化學物理研究所色譜中心PEG-20M毛細管色譜柱（30 m× ?0.25 mm×0.25 μm）;柱溫為150 ℃，保持 ?6 min;進樣口溫度為270 ℃;檢測器溫度為280 ℃;檢測器采用FID;載氣為氮氣（N2）;色譜柱流量1.5 mL/min;進樣模式采用分流進樣;進樣1.0 μL，分流比為20∶1。

在上述色譜條件下，操作人員分別取陰性對照溶液、試劑乙醇溶液、對照品溶液和供試品溶液1 μL進樣分析，結(jié)果表明理論板數(shù)按丙二醇計算，不低于10 000，色譜峰分離度良好，對照品及樣品色譜圖見圖1。

3 ?方法與結(jié)果

3.1 溶液制備

3.1.1 對照品溶液

精密稱取對照品丙二醇0.5 g，置100 mL量瓶中，加無水乙醇適量，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，制每1 mL含丙二醇5 mg的對照品溶液。

3.1.2 供試品溶液

取飼料添加劑50%丙二醇（包膜型）樣品適量，置于研缽中，研至細粉，取研細后的粉末約0.25 g，置50 mL量瓶中，加無水乙醇約20 mL，超聲10 min，冷卻，用無水乙醇定容至刻度，搖勻，備用。

3.1.3 陰性溶液

按照處方比例和制備工藝制備不含丙二醇的陰性樣品，按“供試品溶液”制備方法制得陰性溶液。

3.1.4 乙醇試劑溶液

取色譜純無水乙醇適量，過濾后備用。

3.2 方法專屬性

分別吸取上述4種溶液各1 μL進樣，按照上述色譜條件進行檢測，可見丙二醇對照及樣品均在3.1 min左右出現(xiàn)丙二醇特征吸收峰，陰性對照和溶劑乙醇在丙二醇位置無干擾。

3.3 線性關(guān)系考察

精密量取3.1.1中制備的丙二醇對照品溶液2 mL、4 mL、6 mL、8 mL和10 mL，分別置于10 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，進樣1.0 μL測定。以對照品溶液濃度（X，mg/mL）為橫坐標，以對照品峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線，丙二醇回歸曲線方程為：Y=295 211 X=24 304.1，r2=0.999 6，丙二醇在1.0 mg/mL～5.0 mg/mL范圍內(nèi)，與峰面積成良好線性關(guān)系。

3.4 精密度試驗

取對照品溶液在上述色譜條件下連續(xù)進樣6次，峰面積的相對標準差（Relative Standard Deviatio，RSD）結(jié)果為：0.46%。

3.5 重復性試驗

取樣品精密稱0.25 g，精密稱定，按3.1.2所述的方法操作，樣品重復進樣6次。在上述色譜條件下進樣分析，峰面積RSD為0.25%，結(jié)果表明重復性良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，室溫下放置，分別于0、2 h、4 h、8 h和12 h，在上述色譜條件下進樣分析，計算丙二醇峰面積的RSD為 0.50%，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.7 回收率試驗

取已知含量的飼料添加劑50%丙二醇（包膜型）3份，每份精密稱取粉末0.25 g，分別精密加入低、中、高3種濃度的對照品溶液，按照上述方法操作，在上述色譜條件下分析，計算平均回收率。加樣回收率測定結(jié)果見表1。

3.8 樣品測定

精密稱取飼料添加劑50%丙二醇（包膜型）樣品0.25 g，置于50 mL量瓶中，按3.1.2所述的方法操作，在上述色譜條件下對3批次50%丙二醇進行3個樣本分析，計算含量，結(jié)果見表2。

3.9 檢出限與定量限

選取一段平穩(wěn)基線，根據(jù)LabSolutions軟件的計算，以3倍S/N為檢出限，10倍S/N為定量限，計算出本方法的丙二醇的檢出限為1.0 μg，定量限為3.2 μg。

4 ?討論

4.1色譜柱的選擇

本方法常規(guī)使用聚乙二醇為固定相，為了獲得更好的分離效果，先選取60 m的色譜柱，但試驗結(jié)果表明該色譜柱出峰的峰形較差，易拖尾。后改為30 m色譜柱，色譜峰分離符合要求，峰形良好。

4.2 樣品前處理方式的選擇

丙二醇包膜處理后，由于使用了棕櫚油進行沸騰包膜制粒，丙二醇被棕櫚油包裹，若樣品不經(jīng)特殊處理，被棕櫚油包膜的丙二醇不能全部釋放到溶劑中，會造成檢測結(jié)果不準，誤差偏大，故先采取了研磨的方式，破壞包膜材料的骨架，再超聲，使丙二醇充分溶解到溶劑乙醇中。

4.3 柱溫的確定

化工行業(yè)標準HG/T4980-2016以及多數(shù)文獻報道中，測定丙二醇柱溫均為升溫程序[3]，檢測一個數(shù)據(jù)，至少需要20 min左右，時間長，效率不高，不利于大批量的規(guī)模化研發(fā)和質(zhì)量控制。我們經(jīng)過試驗確定，采用150 ℃恒溫 6 min，主峰丙二醇保留時間為3.1 min，峰型良好，分離度符合要求，縮短了檢測時間，提高了工作效率。

本研究建立了氣相色譜外標法測定包膜型丙二醇的分析方法，方法快速、準確、重復性好，為飼料添加劑丙二醇（包膜型）的生產(chǎn)和質(zhì)量控制提供依據(jù)。□□

參考文獻：（3篇，略）