豬早期胚胎發(fā)育中SOX2基因啟動(dòng)子活性分析

趙劍超，柴壯，郭詩(shī)萌，劉忠華

研究報(bào)告

豬早期胚胎發(fā)育中基因啟動(dòng)子活性分析

趙劍超，柴壯，郭詩(shī)萌，劉忠華

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030

轉(zhuǎn)錄因子SOX2 (sex determining region Y-box2)在早期胚胎發(fā)育第一次譜系分化以及內(nèi)細(xì)胞團(tuán)多能性維持等方面具有重要的作用。但是目前有關(guān)基因啟動(dòng)子的系統(tǒng)研究較少，尤其是在豬()中尚無相關(guān)報(bào)道。為系統(tǒng)分析豬基因啟動(dòng)子在早期胚胎中的活性，本研究通過優(yōu)化顯微注射體系中綠色熒光蛋白表達(dá)載體種類和注射時(shí)間，構(gòu)建了適合豬基因啟動(dòng)子活性分析的參照體系和顯微注射體系；對(duì)豬基因翻譯起始位點(diǎn)上游5000 bp區(qū)域進(jìn)行轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)該區(qū)域存在4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)簇；針對(duì)上述區(qū)域設(shè)計(jì)并構(gòu)建相應(yīng)的缺失型基因啟動(dòng)子報(bào)告載體，利用建立的顯微注射體系將其導(dǎo)入胚胎，通過mCherry熒光強(qiáng)度以及qRT-PCR定量分析基因啟動(dòng)子中不同轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)簇對(duì)啟動(dòng)子活性的影響。結(jié)果表明，與全長(zhǎng)基因啟動(dòng)子相比，基因翻譯起始位點(diǎn)上游2254~2442 bp區(qū)域缺失后，豬4-細(xì)胞和8-細(xì)胞胚胎中基因啟動(dòng)子活性下降至17.8%，該缺失區(qū)域中僅包含兩個(gè)NF-AT(nuclear factor of activated T cells)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。因此，本研究結(jié)果推測(cè)豬基因啟動(dòng)子中NF-AT轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)是影響豬早期胚胎基因啟動(dòng)子活性的關(guān)鍵位點(diǎn)。本研究為揭示豬早期胚胎發(fā)育中基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制提供了數(shù)據(jù)支持。

基因；啟動(dòng)子活性；豬

SOX2蛋白作為重要的轉(zhuǎn)錄因子，廣泛表達(dá)于胚胎、原始生殖細(xì)胞、神經(jīng)元等多種組織與細(xì)胞中。……