調亡抑制基因Survivin和乙酰基轉移酶p300在食管癌組織中的表達以及臨床意義

梁宗英 侯繼申 張樂 張志民 孫光蕊 辛國華

[摘要]目的 探討調亡抑制基因Survivin和乙酰基轉移酶p300在食管癌（EC）組織中的表達及與臨床病理特征的關系。方法 用免疫組化法檢測2016年2月～2018年2月我院胸外科90例EC組織和40例癌旁組織Survivin和p300的蛋白表達水平;分析Survivin和p300蛋白與臨床病例特征的關系及兩者的相關性。結果 ①癌組織中Survivin蛋白的陽性表達率高于癌旁組織，差異有統計學意義（P<0.05）;②癌組織中p300的陽性表達率高于癌旁組織，差異有統計學意義（P<0.05）;③Survivin的表達與EC TNM分期、腫瘤分化程度和淋巴轉移有相關性，差異有統計學意義（P<0.05）。p300的陽性表達率與腫瘤分化程度和淋巴結轉移有相關性，差異有統計學意義（P<0.05）;④Survivin和p300在EC中的表達成正相關（r=0.657，P<0.05）。結論 Survivin和p300的表達水平與EC的分化程度及轉移有相關性，且兩者可能在EC的發生、發展和轉移等方面發揮協同作用。

[關鍵詞]調亡抑制基因;乙酰基轉移酶p300;食管癌;臨床意義

[中圖分類號] R735.1? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）8（b）-0043-04

[Abstract] Objective To investigate the expression of Survivin and acetyltransferase p300 in esophageal cancer （EC） and its relationship with clinical characteristics. Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of Survivin and p300 proteins in 90 EC tissue and 40 para-carcinoma tissue in our Department of Thoracic Surgery， Affiliated Hospital of Chengde Medical College from February 2016 to February 2018. The relationship between Survivin and p300 protein， and clinical characteristics and the correlation were analyzed. Results ①The positive expression rate of Survivin protein in cancer tissues was higher than that in para-carcinoma tissues （P<0.05）. ②The positive expression rate of p300 in cancer tissues was higher than that in para-carcinoma tissues with a statistical difference （P<0.05）. ③The expression of Survivin was associated with TNM stage of EC， tumor differentiation and lymphatic metastasis with statistical significance （P<0.05）. The positive expression of p300 was correlated with tumor differentiation and lymphatic metastasis （P<0.05）. ④The expression of Survivin and p300 was positively correlated in EC and the correlation coefficient （r=0.657， P<0.05）. Conclusion The expression levels of Survivin and p300 are correlated with the degree of differentiation and metastasis of EC， and they may play a synergistic role in the occurrence， development and metastasis of EC.

[Key words] Apoptosis-inhibiting gene; Acetyltransferase p300; Esophageal cancer; Clinical significance

食管癌（EC）是常見的消化系統腫瘤之一，我國EC發病率和死亡率均居世界首位[1]。EC的早期發現、早期診斷和早期治療是改善預后最有效的方法，因此尋找早期診斷、病情監測和判斷預后的敏感有效的監測指標成為近年來研究重點。EC的發生、發展是多因素、多途徑、多種癌基因激活和抑癌基因失活的漸進過程。關鍵基因及蛋白的異常表達在EC的發生和發展過程中起關鍵作用。研究表明，調亡抑制基因Survivin和乙酰基轉移酶p300參與了多種腫瘤的凋亡、侵襲和轉移[2-3]。但迄今為止，Survivin和p300在EC發生發展過程中是否存在協同作用鮮有文獻闡明。本研究用免疫組織化學技術檢測Survivin和p300蛋白在EC癌組織中的表達，分析其與EC人口學特征、分化程度、TNM分期、腫瘤侵襲性、淋巴轉移的關系及兩者在其中的協同作用，為EC的早期診斷和臨床制定治療方案提供依據。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2016年2月～2018年2月我院胸外科治療的90例EC手術患者，其病理類型全部為鱗狀細胞癌。納入標準：①所有患者的臨床資料完整;②均為首發病例;③所有患者術前無化療、放療及免疫治療史。排除標準：①患者的臨床資料不完整;②二次復發病例;③患者術前有放、化療及其他藥物治療史。其中男54例，女36例;年齡38～72歲，平均（59.23±3.69）歲;≥60歲59例，<60歲31例;TNM分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期41例，Ⅲ期28例;細胞分化程度高、中、低分別為34、31、25例;有淋巴轉移54例，無淋巴轉移36例。另選40例距癌組織>6 cm癌旁正常上皮組織標本作為對照組。本研究經我院醫學倫理委員會審批通過，所有患者對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2方法

5 μm石蠟塊切片，經二甲苯脫蠟水化、枸櫞酸鹽修復、H2O2浸潤、PBS沖洗、山羊血清封閉;Ⅰ抗溫育，Ⅱ抗溫育，中間PBS洗滌，DAB顯色、蘇木素染色;乙醇脫水后二甲苯透明及中性樹膠封固。兔抗人BIRC5/p300單克隆抗體購自上海北諾生物科技有限公司，批號PA1848;鼠抗人Survivin單克隆抗體購自上海煊翎生物科技有限公司，批號abx038170。免疫組化試劑盒購自長沙達爾鋒生物科技有限公司，批號BIH0003。

1.3觀察指標及評價標準

觀察Survivin和p300在EC和癌旁組織中的表達;分析Survivin和p300的表達與臨床病例特征的關系;Survivin和p300在EC中表達的相關性。評價標準：400倍光鏡下隨機選10個高倍視野，每視野數100個細胞;Survivin陽性結果：胞質出現黃色或棕黃色顆粒為陽性細胞，陽性細胞占腫瘤細胞的百分比>10%;p300陽性結果：胞質和胞核出現棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細胞，陽性細胞占腫瘤細胞的百分比≥10%。

1.4統計學方法

采用SPSS 18.0統計軟件進行分析，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗;計數資料以率表示，采用χ2檢驗;相關性分析采用Kappa一致性檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 Survivin和p300在EC和癌旁組織中的表達

Survivin在癌組織中陽性表達率高于癌旁組織，差異有統計學意義（P<0.05）。p300癌組織中的陽性表達率高于癌旁組織，差異有統計學意義（P<0.05）（表1）。

2.2 Survivin和p300的表達與臨床病理特征的相關性

Survivin蛋白的表達與患者性別、年齡差異無統計學意義（P>0.05），與TNM分期、腫瘤分化程度和淋巴結轉移相關，差異有統計學意義（P<0.05）;p300的陽性表達與腫瘤的分化程度和淋巴轉移相關，差異有統計學意義（P<0.05）（表2）。

2.3 Survivin和p300在EC中的表達

Survivin和p300在EC中的表達成正相關（r=0.657，P<0.05）（表3）。

3討論

EC是危害人類健康的惡性腫瘤之一。近年來，我國EC的發病率和死亡率雖呈下降趨勢，但發病率和死亡率仍處于相當高的水平[1]。EC的發生和發展是一個多基因參與、多階段的復雜過程。失活的抑癌基因通過參與細胞的凋亡為異常細胞提供生存之機，促使EC的發生和發展。

Survivin是功能最強的細胞凋亡抑制因子，它的表達與多種惡性腫瘤的發生發展密切相關[4-10]。Survivin可干擾細胞凋亡、促進細胞有絲分裂和血管形成。Survivin的高表達可提高腫瘤細胞的存活和生長能力，對腫瘤的診治及預后有深遠的意義[11]。本研究結果顯示，在EC組織中Survivin陽性表達明顯高于癌旁癌旁組織（P<0.05），Survivin蛋白在正常組織中基本不表達，在EC組織過度表達。提示Survivin可能通過直接或間接作用抑制EC細胞的凋亡從而促進EC的發展。Survivin可能通過調控有絲分裂促進腫瘤細胞的異常增殖并抑制凋亡而參與EC的侵襲與轉移[12]。研究者通過RNA干擾技術開展EC與Survivin關系的研究，發現沉默Survivin基因能抑制EC109細胞的增殖，增強Caspases的活性，阻滯細胞周期的進展，誘導細胞凋亡[13]。Survivin在EC的增殖和轉移過程中起到了重要的作用，是預測EC預后的重要分子標志物。同時本研究結果顯示，Survivin的表達與癌組織分化程度、TNM分期、淋巴轉移密切相關（P<0.05），Survivin陽性表達率隨著EC的惡性程度和TNM分期的增加而逐漸增加，在腫瘤浸潤程度和淋巴結是否轉移兩組間亦有顯著性差異。實驗結果與柴小軍等[14]的研究結果一致。EC淋巴結轉移者Survivin蛋白表達升高，提示其可抑制癌細胞的凋亡， 促使腫瘤惡性程度增強，導致EC容易發生轉移。牛朝霞等[15]證實靶向抑制Survivin 基因的表達能顯著降低干擾組Eca-109細胞的體外侵襲與遷移能力。因而Survivin表達與EC侵襲、轉移及預后的關系意義重大。Survivin 蛋白表達聯合ECTNM分期、淋巴轉移及分化程度等臨床病理特征評估后發現，Survivin蛋白陰性，TNMⅠ期、腫瘤分化程度高、無淋巴轉移者，患者預后較好，可能與Survivin 蛋白表達缺失，抑制腫瘤細胞凋亡的功能喪失有關，細胞增殖與凋亡保持平衡，提高了早期患者的生存期。當Survivin蛋白陽性時，細胞惡性程度高、TNMⅡ、Ⅲ期、有淋巴結轉移者，預后較差。可能與Survivin過表達后正常的凋亡減緩，促進腫瘤細胞無限制生長有關。同時Survivin過表達可能促進細胞的有絲分裂和血管的生成以及腫瘤的惡性轉化，導致了腫瘤的局部浸潤和遠處遷移。

p300是乙酰基轉移酶中重要的成員，可通過調節蛋白乙酰化水平而參與腫瘤的發生、發展和轉歸。p300在多種腫瘤組織中的高表達與腫瘤患者的預后密切相關[16-18]。陸平等[19]通過分析肺癌組織發現，p300在肺鱗癌和腺癌中高表達，與腫瘤的分化、分期及淋巴結轉移密切相關。國內外對p300與腫瘤的發生進行了許多研究，但聯合Survivin和p300與EC發生關系的報道鮮見。本研究結果顯示，p300在癌組織中表達的陽性率為68.89%，癌旁組織中的陽性表達率為22.50%。p300的陽性表達與腫瘤的分化程度和淋巴結轉移有相關性（P<0.05），提示 p300可能參與并促進了EC的發生和發展。

本研究結果顯示，Survivin和p300在EC中表達成正相關（r=0.657）。提示Survivin和p300可能共同參與了EC的發生發展過程，并在腫瘤的浸潤和轉移中發揮了重要作用。盡管在胃癌和子宮頸癌中均可見Survivin和p300的表達報道[20]，但兩者聯合在EC發生發展中發揮作用報道較少。p300是腫瘤抑制基因p53的共激活子，調節p53的活性及蛋白的穩定性使細胞周期停滯和細胞凋亡達到一個平衡狀態。研究顯示，EC中p53與Survivin 的表達成顯著正相關，且兩者與腫瘤淋巴結轉移有關[21]。Survivin和p300是通過p53還是其他基因在EC中發揮協同作用仍有待進一步探討。

綜上所述，Survivin和p300在EC組織中的高表達與EC密切相關，且Survivin和p300在EC的發生、發展過程中有共同促進作用，可能是EC發生的重要機制。今后可以將Survivin和p300作為切入點，深入研究其機制，為EC的基因靶向治療提供新的理論依據。

[參考文獻]

[1]張思維，張敏，李光琳，等.2003-2007 年中國食管癌發病與死亡分析[J].中國腫瘤，2012，21（4）：241-246.

[2]王云，李運紅.胃癌中Survivin的研究進展[J].中國臨床研究，2017，30（4）：546-548.

[3]楊陽，陳公.P300/CBP在惡性腫瘤中的研究進展[J].實用腫瘤學雜志，2014，28（2）：188-192.

[4]Poomsawat S，Punyasingh J，Vejchapipat P，et al.Overexpression of survivin and caspase 3 in oral carcinogenesis[J].Appl Immunohistochem Mol Morphol，2014，22（1）：65-71.

[5]黨存曙，王涵，劉大鵬，等.Survivin在不同TNM分期肝細胞癌組織中的表達及意義[J].現代中西醫結合雜志，2018， 27（24）：2627-2629，2633.

[6]陸毅，姚暉，王曙.Survivin基因及蛋白表達與人786-0腎透明細胞癌細胞增殖、凋亡的相關性研究[J].標記免疫分析與臨床，2018，25（8）：1223-1226，1248.

[7]梁言，劉義，陳建發，等.Survivin與結直腸癌的研究進展[J].中國老年學雜志，2018，38（22）：5620-5623.

[8]韓芬.Survivin、NF-KB與COX-2在喉鱗狀細胞癌中的表達及意義[J].醫學新知雜志，2018，28（2）：163-164.

[9]徐亞東，李華，宋春霞.甲狀腺癌組織中Stat3、Survivin、MMP-13的 表達變化及對淋巴結轉移的影響[J].山東醫藥，2017，57（45）：74-76.

[10]金小龍，易莉莎，黃子健.Survivin通過ERK/E-cadherin信號通路促進子宮內膜癌細胞增殖和遷移[J].中華生物醫學工程雜志，2018，24（5）：371-376.

[11]Garg H，Suri P，Gupta JC，et al.Survivin：a unique target for tumor therapy[J].Cancer Cell Int，2016，16：49.

[12]Bongiovanni L，D′Andrea A，Romanucci M，et al.Epithelial-to-mesenchymal transition：immunohistochemical investigation of related molecules in canine cutaneous epithelial tumours[J].Vet Dermatol，2013，24（1）：195-203.e42-43.

[13]牛朝霞，李寧寧，陳潔，等.RNA干擾沉默Survivin基因對Eca-109細胞增殖與凋亡的影響[J].鄭州大學學報（醫學版），2015，50（6）：737-740.

[14]柴小軍，王劍云，鄭健，等.食管癌組織中HIF-1α、Survivin、CyclinD1蛋白的表達及其意義[J].現代生物醫學進展，2013，13（2）：221-224.

[15]牛朝霞，張秀芝，陳潔，等.Survivin基因沉默抑制食管癌Eca-109細胞的侵襲與遷移[J].安徽醫科大學學報，2016， 5（2）：185-187.

[16]楊宇石，石玉，鄭美娟，等.乳腺癌中乙酰化轉移酶P300和H3K56乙酰化蛋白表達與新輔助化療及臨床病理特征的相關性[J].臨床與實驗病理學雜志，2018，34（7）：747-751.

[17]Natalie J，Torok NJ.P300，a new player in Mechanosensitivity and activation of cancer-associated fibroblasts[J].Gastroenterology，2018，154（8）：2025-2026.

[18]王嶸，易敏，董烽，等.結腸癌組織P300/CBP相關因子表達及其臨床意義[J].中華腫瘤防治雜志，2015，22（2）：120-124.

[19]陸平，張道榮，蔡存偉，等.HIF-1α與P300/CBP在肺鱗癌和肺腺癌中的表達及意義[J].現代腫瘤醫學，2009，17（1）：55-57.

[20]張先華，閻翠華，朱慧芳，等.p300與Survivin在宮頸癌中的表達及相關性探討[J].實用醫學雜志，2007，23（6）：830-832.

[21]趙文鵬，路平，苗戰會.p53、Survivin 在食管癌中的作[J].現代生物醫學進展，2010，10（6）：1140-1142.

（收稿日期：2018-12-24? 本文編輯：崔建中）