細(xì)胞角蛋白18的基因克隆及其對Hep G2肝癌細(xì)胞增殖遷移的影響

孫達(dá)權(quán)，周莉莉，石 松，薛殿婷，徐瑩瑩

(貴州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

細(xì)胞角蛋白(cytokeratin，CK)又叫角蛋白，主要存在于上皮細(xì)胞中，是參與固定細(xì)胞核和維持細(xì)胞形態(tài)的重要成分[1-2]。上皮細(xì)胞中的角蛋白有20種以上的CKs亞型，其表達(dá)主要依賴于上皮細(xì)胞的分化程度和類型[3]。在肝臟中，細(xì)胞角蛋白8(CK8)和細(xì)胞角蛋白18(CK18)最為常見，它們均由中央α-螺旋桿狀結(jié)構(gòu)域與非α-螺旋N-末端頭部和C-末端尾部結(jié)構(gòu)域組成[4-5]。不同細(xì)胞角蛋白間可以形成非共價(jià)雜聚物，聚集成長絲并產(chǎn)生維持細(xì)胞完整性的細(xì)胞質(zhì)絲網(wǎng)絡(luò)[6]。在非癌性組織胚胎發(fā)育過程中，CK18不是廣泛性表達(dá)的，而是隨著上皮細(xì)胞發(fā)育的階段不同而特異性表達(dá)的，如CK18在正常腺上皮細(xì)胞、移行上皮細(xì)胞和肝細(xì)胞中表達(dá)，但不在鱗狀上皮分化而來的上皮細(xì)胞中表達(dá)[7-10]。

在腫瘤診斷中，CK18作為腫瘤標(biāo)志物廣泛用于細(xì)胞癌性診斷[11]。研究表明，CK18在不同類型的腫瘤中扮演的角色各有差異。在乳腺癌或結(jié)直腸癌中，CK18與腫瘤預(yù)后較差相關(guān)[12-13]。在口腔癌和尿道移行細(xì)胞癌中，CK18表達(dá)上調(diào)與不良預(yù)后相關(guān)[14]。這些研究結(jié)果暗示在不同類型的腫瘤中，CK18功能可能各不相同，要確定CK18在某一種腫瘤中的具體作用需要對其進(jìn)行具體研究和分析。

本研究通過構(gòu)建CK18單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)Hep G2肝癌細(xì)胞株，觀察CK18對Hep G2肝癌細(xì)胞增殖和遷移的影響。

1 材料與方法

1.1 主要材料 Hep G2細(xì)胞購自中科院上海細(xì)胞庫(中國)。新生牛血清購自杭州四季青(中國)。RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基、Trizol、Lipofectamine 2000購自Invitrogen(美國)。pEBFP-C1保存于本實(shí)驗(yàn)室。……