牙齦卟啉單胞菌血凝集素黏附結構域ha2基因在大腸桿菌中的融合表達和純化

曾鳳嬌，楊 琳，劉建國，田 源，陳 靖，白國輝

(1.遵義醫科大學 研究生院，貴州 遵義 563099；2.貴州省普通高等學校口腔疾病研究特色重點實驗室，貴州 遵義 563099；3.貴陽市口腔醫院，貴州 貴陽 550002)

牙周病是危害人類牙齒及全身健康的主要口腔疾病，發病率高，嚴重影響著1/3成人以及超過50%的65歲以上老年人的牙齒健康[1]。牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis，P.gingivalis)對于慢性牙周病具有明確的致病作用[2]，P.gingivalis主要通過其菌體表面的多種毒力因子發生致病作用[3]。

牙齦素是P.gingivalis重要的毒力因子，有研究表明其在細菌逃避免疫防御機制中也發揮了一定的作用[4]，對于牙周組織的破壞過程中產生重要的影響。rgpA基因是牙齦素的編碼基因之一，其中有一段名為血凝集素黏附結構域(hemagglutinin A,hagA)的功能基因，分別編碼HA1、HA2、HA3、HA4結構域。有學者對4個結構域進行功能分析，認為HA2為P.gingivalis的關鍵區域，能夠調控介導細菌凝集并黏附至牙周組織，破壞牙周組織形態[5]。

本文在原核表達質粒pET21a-ha2成功構建的基礎上，檢測其在大腸桿菌中的表達，并純化鑒定表達產物，為課題組后期SIgA型抗HA2特異性抗體的檢測和疫苗在動物體內的表達檢測奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料 原核表達質粒pET21a-ha2、Rosetta感受態細胞由貴州省普通高等學校口腔疾病研究特色重點實驗室提供。異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、SDS-PAGE凝膠制備試劑盒、BCA蛋白濃度測定試劑盒、Ni-NTA瓊脂糖凝膠6FF(索萊寶公司，北京)；DNA Marker(BM5000)(Biomed，北京)；PageRuler預染蛋白Ladder(thermo，美國)。

1.2 方法

1.2.1ha2 基因片段的菌液PCR鑒定ha2基因片段PCR反應退火溫度為58℃，反應產物1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(見表1)。……