下調NDUFA4對人結直腸癌SW480細胞體外生長的影響

劉士明，丁 濤，雷良玉，胡 琳，冒 靈，陳 超，郭萌萌，徐 林

(貴州省基因檢測與治療特色重點實驗室暨貴州省生物治療人才基地暨遵義醫科大學 免疫學教研室，貴州 遵義 563099)

結直腸癌是最常見的原發性惡性腫瘤之一，近年來，其發病率和死亡率逐年上升并呈現年輕化的趨勢，對人的生命健康造成重大的威脅[1-2]。RNA干擾(RNA interference, RNAi)是真核生物在進化過程中一種高度保守的機制, 它與共抑制、協同抑制、基因沉默、基因阻滯以及發育等許多重要的生物學過程密切相關[3-4]，也可利用其干擾腫瘤細胞中特定基因的表達，用于腫瘤發生機制的探討和基因治療策略的開發[5-6]。Ⅰ型輔酶脫氫酶1α亞復合物4(NADH dehydrogenase 1 alpha subcomplex 4,NDUFA4)，是由定位于人7號染色體p21.3上的NDUFA4 基因編碼的線粒體呼吸鏈蛋白質，也是哺乳動物線粒體細胞色素C氧化酶(COX;Complex IV)中的重要亞基，分子量約為9 kb，具有NADH脫氫酶和氧化還原酶活性，能夠將電子從NADH轉移至呼吸鏈，參與能量代謝[7-8]。已有研究顯示NDUFA4基因的異常改變與包括腫瘤在內的多種疾病發生發展密切相關[9-10]。然而，NDUFA4在人結直腸癌發生中的可能作用和機制尚未清楚。因此，本研究旨在利用RNA干擾技術(RNAi)，觀察下調NDUFA4表達對人結直腸癌SW480細胞體外生長的影響，并初步探討其作用機制，為后續深入研究NDUFA4分子在人結直腸癌發生中的作用提供前期實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料 細胞株、質粒和主要試劑：人結腸癌SW480細胞株購于中國生命科學院，p-Cont質粒(P-EGFP-N1質粒)由本實驗室保存，NDUFA4-RNAi重組質粒、PCR引物均購于上海吉瑪制藥技術有限公司；……