河池市100例地貧羊水產前診斷分析

【摘 要】目的：探討羊水產前診斷在地中海貧血（以下簡稱“地貧”）胎兒中的應用，通過羊水產前診斷，檢出中、重型地貧兒，知情選擇終止妊娠，降低出生缺陷。方法：采用GaP-PCR方法診斷中國人常見的東南亞型（--SEA）基因缺失、-α3.7基因缺失和 -α4.2基因缺失；采用反向斑點雜交法（PCR-RDB）檢測常見的αT珠蛋白基因αCS、αQS 和αWS 3種點突變及17種β-地貧基因突變類型，對100例孕婦羊水進行產前地貧基因檢測。結果：檢測出正常胎兒 23例占 23%，異常胎兒77例占77%。其中，α-地貧胎兒 42 例占42%，β-地貧19 例占19%，α復合β-地貧16 例占 16%。結論：在孕中期對高危人群行羊水產前診斷可以有效地阻止中、重型地貧患兒的出生，從而降低出生缺陷。

【關鍵詞】地中海貧血；產前診斷；羊水；出生缺陷

【中圖分類號】R714 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484（2019）01-0245-02

地中海貧血（簡稱地貧）是一類由于α或β珠蛋白基因發生缺失或點突變，使其編碼的人α或β珠蛋白鏈缺如或不足，導致嚴重的溶血性貧血[1]。全世界至少有3.45億人攜帶地中海貧血的致病基因，我國長江以南各省區為高發區。根據珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，主要分為α-地貧和β-地貧兩種類型。α、β-地貧根據臨床癥狀的嚴重程度不同，又可以分為靜止型地貧、輕型地貧、中間型及重型地貧。靜止型和輕型地貧無需特殊治療，中、重型地貧除了輸血外，國內外尚無有效的治療方法，重點在于預防[2]。為探討我市預防中、重癥地貧的有效手段及其效果，現對來我院優生遺傳門診就診的100例確診為同型地貧基因攜帶夫婦的胎兒進行產前地貧基因診斷，將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2016年1月～2017年12月在本院優生遺傳門診就診的 100 對同型地貧基因攜帶者，通過優生遺傳咨詢，并知情選擇進行羊膜腔穿刺術產前基因診斷夫婦，其中，同為α-地貧基因攜帶者 48 對，同為β地貧基因攜帶者19 對，同型地貧且一方為α復合β地貧攜帶者 33 對，孕婦年齡在19～42歲，孕周18～24周，受檢夫婦均來自河池市戶籍，術前簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

1.2.1 標本采集孕婦排空膀胱，取仰臥位，常規嚴格無菌消毒，產前診斷醫生在B 超引導下，用羊膜腔穿刺針穿刺進入羊膜腔，抽前2ml 羊水棄去，以防母體細胞污染，再抽取羊水20ml，分別置2根10ml無菌離心管中，每管10ml，交實驗室人員，標本用于DNA 的初次提取及細胞培養后的二次平行實驗。

1.2.2 基因檢測

（1）α珠蛋白基因檢測采用Gap-PCR方法診斷中國人常見的東南亞型（--SEA）基因缺失、-α3.7 基因缺失和 -α4.2基因缺失；采用反向斑點雜交法（PCR-RDB）檢測常見的αT珠蛋白基因αCS、αQS和αWS 3種點突變型地貧基因，基因診斷試劑盒購自深圳益生堂生物企業有限公司，檢測方法按試劑盒操作說明書進行。

（2）β珠蛋白基因檢測采用PCR結合反向斑點雜交法（PCR-RDB），檢測中國人常見的β-地貧17種基因突變類型，基因診斷試劑盒購自深圳益生堂生物企業有限公司，檢測方法按試劑盒操作說明書進行。

1.3 遺傳咨詢 地貧基因診斷結果以書面報告形式送交到孕婦手中，隨后由遺傳醫生對其進行遺傳咨詢并給予相應的醫學建議，胎兒診斷為重型或中間型α或β-地中海貧血，告知胎兒預后，提出知情選擇的醫學指導意見。另外，根據產前診斷管理方案，羊水地貧基因檢測報告由2名專業技術人員簽發，審核人必須具備副高以上專業技術職稱；檢測結果的原始數據和標本必須保存至少3年，DNA標本須保存于-70℃[3]。

1.4 隨訪 100 例孕婦均在產前診斷后6個月由專人電話隨訪，了解中重型地貧胎兒結局、非中重型地貧胎兒出生后表型和發育情況。中重型地貧胎兒引產者，取胎兒臍血行地貧基因檢測，其余繼續妊娠分娩者，出生后2個月抽取外周血行地貧基因檢測，以驗證產前診斷結果的準確性。

2 結果

100例羊水標本中，檢測出正常胎兒23例占 23%，異常胎兒77例占77%。其中，α-地貧胎兒42 例占42%，β-地貧19例19%，α復合β地貧 16 例占 16%。

2.1 夫婦為同型α地貧的產前診斷結果，見表1。

夫婦為同型α-地貧攜帶者共 48對，產前診斷檢出正常胎兒 15例（31.25%），異常胎兒33例（68.75%），其中，靜止型α-地貧6 例（12.50%），輕型α-地貧14例（29.17%），中間型α-地貧8例（16.67%），Barts 水腫胎 5例（10.42%）。

2.2 夫婦為同型β-地貧的產前診斷結果，見表2

夫婦為同型β-地貧攜帶者共19對，產前診斷檢出正常胎兒7 例（36.84%），異常胎兒12例（63.16%），其中，輕型β-地貧7例（36.84%），重型β地貧5例（26.32%）。

2.3 夫婦一方為α復合β-地貧的同型地貧產前基因診斷結果，見表3。

夫婦同型地貧且一方為α復合β-地貧共33例，檢出正常胎兒1例，異常胎兒32例，其中，靜止型α-地貧3例，輕型α-地貧1例，中間型α-地貧4例，Barts 水腫胎1例。輕型β-地貧3例，重型β-地貧4例，α復合β-地貧16例（靜止型α-地貧或輕型α-地貧復合輕型β-地貧9例，中間型α-地貧復合輕型β-地貧4例，重型α-地貧復合輕型β-地貧1例，靜止型α-地貧或輕型α-地貧復合重型β-地貧2例 ）。

2.4 隨訪 100 例行產前診斷的孕婦隨訪未發生術后并發癥， 20例胎兒引產（包括7例Barts水腫胎，2例中間型α-地貧， 1例中間型α-地貧復合輕型β-地貧，8例重型β-地貧，2例重型β-地貧復合輕型α-地貧），引產胎兒取臍血行地貧基因診斷，其余繼續妊娠胎兒，則出生后2個月抽取外周血行地貧基因檢測，均與產前診斷結果一致。10例HbH病及1例重型β地貧胎兒母親知情選擇繼續妊娠，這例重型β地貧胎兒孕婦在妊娠期間，當地衛計委及醫務人員多次上門動員其終止妊娠，均不同意，只能尊重其意愿。所有胎兒出生后半年電話隨訪，除1例重型β地貧患兒需輸血外，其他無重度貧血表型。

3 討論

地貧是一組嚴重威脅人類健康的致死、致殘的遺傳性血液病，是人類最常見的單基因遺傳病之一。重型α-地貧胎兒多在妊娠末期胎死腹中或分娩后死亡；重型β-地貧患兒一般在出生后3～6個月出現癥狀，需輸血維持生命，不接受治療的患兒常常因發育遲緩而呈典型的“地貧面容”，常在5歲以前因嚴重貧血或繼發感染在兒童期死亡[4]。根據廣西2010年的地貧流調顯示，廣西地貧發病率最高，人群攜帶率為24.51%，α-地貧攜帶率為17.55%，β地貧攜帶率為6.43%，高于廣東地區[5]。由于同型地貧攜帶者生育重型地貧患兒的風險為25%，高攜帶率導致孕育高風險胎兒增加，而且在臨床上尚無有效的根治手段，因此，對夫婦雙方為同型地貧基因攜帶者的孕婦，進行產前診斷，避免重癥地貧兒出生，是最積極有效的預防措施。目前臨床上常用的產前診斷方法有早孕期絨毛穿刺、妊中期羊膜腔穿刺和臍帶血穿刺，其中羊膜腔穿刺安全性高，具有操作簡便、并發癥少和流產率低的優點 [6] ，是目前用于產前診斷的主要方法。

本資料顯示在我院行羊水產前診斷的100 例孕婦，檢測出正常胎兒 23例，異常胎兒77例，異常胎兒檢出率為77%。其中，α-地貧42例占42.0%，β-地貧19例占 19.0%，α復合β-地貧16例占16%，結果顯示α-地貧發生率最高，由此可見地貧在廣西的高發性和嚴重性；在檢出的異常胎兒中，中、重型地貧胎兒28 例，占比為28%；其中，20例孕婦咨詢后知情選擇終止妊娠，包括7例Barts 水腫胎，2例中間型α-地貧（-- SEA /αCSα；αCSα/αCSα）， 1例中間型α-地貧復合輕型β地（-- SEA /αCSα復合β41-42），8 例重型β-地貧，2例重型β-地貧復合輕型α-地貧；另外1例重型β-地貧及7例中間型α-地貧繼續妊娠。從研究結果看出，基本上重型地貧胎兒經咨詢醫生后均選擇終止妊娠，這樣在一定程度上減輕了給社會及家庭帶來的沉重精神負擔和經濟負擔。而HbH病的胎兒則由孕婦及配偶決定胎兒的去留，但仍有極個別妊娠重型地貧胎兒孕婦，因為文化程度低，對地貧的知曉率差，依從性低，會選擇繼續妊娠，因為患兒出生后巨大的醫藥費，往往因疾返貧，后悔莫及。因此，在人群中大力宣傳地貧的防控知識，開展產前診斷是非常有必要的。

本研究顯示100對同型地貧基因攜帶夫婦中，有33對夫婦其中一方為α復合β-地貧攜帶者，所占比例為33%。王光麗等[7]報道，廣西桂林地區175對同型地貧基因攜帶夫婦中，僅有 20 對其中一方為α復合β-地貧攜帶者，所占比例為11.42%，明顯低于本研究。上述結果提示本地區地貧基因的復雜性，必將增加地貧防治工作的難度，這需要我們臨床醫生在工作中不斷積累經驗，當夫婦一方是復合型地貧時，另一方不論篩查結果是陽性或陰性，均應行α-地貧基因檢測，因為，靜止型α-地貧篩查低，容易導致漏診。

從本研究顯示及隨訪結果看，20例胎兒引產后取臍血行地貧基因診斷，80例繼續妊娠胎兒，則在出生后2個月抽取嬰兒外周血行地貧基因檢測，均與產前診斷結果一致。所有胎兒出生后半年電話隨訪，除1例重型β地貧患兒需輸血外，其他無重度貧血表型。100 例行產前診斷的孕婦隨訪未發生術后并發癥，無死胎、流產及宮內感染等等并發癥；本研究中的 100 例地貧羊水產前診斷，成功率高，并發癥少，方法可靠，值得大力推廣。

預防出生缺陷有三道防線：一級預防：婚檢、孕前優生優育檢查及孕期保健等；二級預防：產前篩查與產前診斷；三級預防：針對已出生的缺陷兒進行有針對性的矯治。河池市于2013年開始陸續在全市范圍內開展了地中海貧血防控項目，以及應用監測信息管理系統對納入管理的目標人群實行免費地貧基因檢測。通過對婚檢、孕檢地貧篩查、地貧基因檢測、地貧高風險的孕婦進行羊膜腔穿刺產前診斷，是減少出生缺陷、提高出生人口高素質的必要手段。

參考文獻

[1]Higgs DR，Engel JD，Stamatoyannopoulos G.Thalassaemia [J] Lancet，2012，379（9813）：373-383.

[2]付春云，陳少科，張強等.珠蛋白生成障礙性貧血的預防策略及問題[J].檢驗醫學與臨床，2014（19）：2756-2757.

[3]徐湘民.地中海貧血預防控制操作指南[M].北京：人民軍醫出版社，2011.6.

[4]蘇金玉，翟惠敏.β-地中海貧血輸血治療的研究進展[J].廣東醫學，2011，32（15）：2063-2065.

[5]廣西地中海貧血防治計劃培訓教材陳荔麗等P1.

[6]Najmabadi H，Ghamari A，Sahebjam F，et al. Fourteen-Year experience of prenatal diagnosis of thalassemia in Iran [J].Community Genet，2006，9（2）：93-97.

[7]王光麗，鄭海清，曾 丹，等.桂林地區產前地中海貧血基因診斷175例分析[J].中國優生與遺傳雜志2018，26（6）：30.

作者簡介：

楊艷，女，1965年生，廣西河池市婦幼保健院產科副主任醫師，1988年畢業于廣西河池地區衛生學校婦幼醫士專業，分配到廣西河池市婦幼保健院婦產科，2000年畢業于廣西醫學院臨床醫學專業，長期從事婦產科臨床及優生遺傳咨詢工作。