豬附紅細胞體病實驗室診斷

張志慶

摘要：依照山東省菏澤市牡丹區某養殖場生豬養殖現狀，整合養殖場豬群發病死亡的主要原因，通過無菌采集方式獲取發病豬血液作為檢驗病料，應用血涂片、細菌分離培養、病毒核酸檢驗等方式進行實驗室應用診斷。從結果中獲取結論，其中細菌分離培養以及病毒核酸檢驗結果大多都表現為陰性，通過血涂片操作顯示出大多數紅細胞邊緣整齊度較差，存有不同不規則形狀，能適應紅細胞體基本感染特征，其養殖場此例豬群發病重要原因是附紅細胞體感染。

關鍵詞：豬;附紅細胞體病;實驗室診斷

中圖分類號：S858.28? 文獻標識碼：B???? doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.14.052

0引言

附紅細胞體病主要是由附紅細胞體誘發疾病，主要表現為發熱、溶血性貧血、黃疸等人畜共患傳染病，該病病原體屬于支原體科，此病大多發生在夏秋時節，容易產生流行性，加上病害寄主范圍較廣，在目前多種動物養殖中都會產生。

1實驗室診斷材料與方法

在檢測病科中主要通過無菌采集方式獲取5頭病豬血液，在試劑選用中主要是應用革蘭氏染色液、RNA快速抽提試劑盒、基因組DNA提取試劑盒。豬圓環病毒2型、繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、乙型腦炎病毒等。在細菌分離培養中，在潔凈度較高的工作臺中，通過滅菌接種環提取相應的抽檢血液樣本，將其在鮮血以及常見的瓊脂培養基中均勻性涂抹，成功接種后在培養基中37℃培養箱環境中倒置培養16?24 h，實驗人員要對菌落具體變化現狀進行分析。在病毒核酸提取中，通過RNA抽提試劑盒對總RNA快速提取。之后做好cDNA以及PCR擴增操作，對PCR產物凝膠電泳現狀進行分析，在1.2%瓊脂糖凝膠上將獲取的PCR進行電泳，再將凝膠塊能放人到凝膠成像儀器中，對其結果進行分析。在血涂片檢查中，要應用革蘭氏染色鏡進行檢驗，對血涂片革蘭氏進行染色操作，實驗人員要通過顯微鏡進行觀察檢查。在姬姆薩染色鏡檢操作中，選取常用方法對血涂片進行合理制備，等到血膜全部干后，應用甲醇進行固定。在染色架中放置血涂片，及時滴加稀釋成功的姬姆薩染色液，使其能在完整的血膜中進行覆蓋，在正常室溫狀態下將其染色15?30 min。實驗人員選取適量蒸餾水從玻片端進行沖洗，玻片風干后及時進行鏡檢^[1]。

2結果與分析

對患有紅細胞體病的病死豬進行剖檢能得出，生豬脂肪層、內臟器官等處都受到不同程度感染，泛發性黃疸表現突出。生豬全身肌肉群開始變色黯淡，血液大多都是表現為水樣狀態，凝固性較差。全身淋巴結腫大問題較為嚴重，切面呈現出外翻現象，潮紅突出，有諸多液體滲出。肝臟腫大問題嚴重，質地脆弱，細胞大多是表現為脂肪變性問題，主要是為黃棕色以及土黃色。膽囊腫大突出，并且膽汁濃稠度較高，脾臟位置腫大明顯，質地脆弱。在膀胱粘膜中布有不同程度血點，心肌松軟蒼白，腦部位置存有嚴重積液問題。

將鮮血營養瓊脂培養基與普通瓊脂培養基通過接種血液后，37℃環境中通過16 h培養，并未能發現菌落存在生長現狀。在病毒核算檢驗中，選取各類特異引物對核酸樣本采取PCR擴增措施，將獲取的產物在瓊脂糖凝膠中進行電泳，未能出現預期擴增條帶，各個病毒在檢測過程中主要表現為陰性。在血涂片檢查結果分析中能得出，技術人員對血涂片革蘭氏染色鏡檢并未發現細菌存在。從姬姆薩染色鏡檢現狀中能得出，在可見范圍內諸多紅細胞開始發生明顯變形問題，其原有的光滑形態開始逐步喪失，邊緣處平整度較差，開始展示出層次不齊的不規則形狀。在紅細胞表層中大量附著的病原體會被染成不規則性顆粒，技術人員基于油鏡進行觀察，其外部不規則現象突出，中間位置明亮度較高，將其判定為附紅細胞體。

在試驗開展中主要對5個發病豬血液樣本進行細菌分離培養操作，對血涂片進行全面檢查，做好病毒核酸規范化檢測，對附紅細胞體感染問題進行確診。附紅細胞體屬于嗜血支原體科，該病一年四季在生豬養殖中均會發生，其中夏秋季節高發，可以基于垂直以及水平方式進行傳播，大量昆蟲等會對此類病害進行傳播。在生豬長期養殖中養殖環境較差，管理措施不合理，養殖環境溫度變化較快等都會導致病情全面擴大，帶來較為嚴重的經濟損失。目前針對附紅細胞體病在診斷中可選取的診斷應用措施較多，如應用較多的血涂片檢查診斷方式，但是此類方式僅是作為實驗輔助性方式，因為其會產生假陽性結果，誘發誤判問題。在實驗診斷中應用速率較快的是酶聯免疫吸附試驗，但是此類方法在具體應用中受到檢測抗原純度影響會產生諸多假陰性結果，目前都是在各類流行病學檢查中應用。在診斷方法應用中分子生物學診斷技術應用重要性較強，在臨床中應用較多的是PCR技術，其敏感性與特異性突出。雖然針對此類疾病可以選取多種診斷方式，但是由于生豬患病后各項表現不明顯，對疾病診斷工作開展具有較大限制作用^[2]。

3預防與治療措施

在生豬現代化規模養殖中要對養殖飼養各個環節進行規范化管理，在養殖活動中投入充足高營養含量的全價飼料，確保豬群能健康生長。要對養殖環境溫度情況進行控制，做好養殖區域通風以及溫度控制工作。對飼養中存有的各類應激因素進行控制。在豬附紅細胞體病高發階段，要及時采取針對性措施對吸血昆蟲進行殺滅。技術人員要定期對針頭、注射器等進行全面消毒處理，在疫苗接種及治療注射中，1頭生豬使用1個針頭^[3]。在母豬接產中要及時選取針對性消毒控制措施。養殖中技術人員要強化養殖環境消毒處理，定期對豬舍環境進行清理，對生豬排泄物進行清除，做好衛生消毒工作與驅動管理操作。最大程度降低生豬養殖中病害發生幾率。在日常投喂飼料中補充適量金霉素、四環素、土霉素、阿散酸等，對豬附紅細胞體病具有良好預防應用成效。

如在每噸飼料中要補充48 g金霉素或是在每升飲水中添加50 mg金霉素，連續應用1周時間，能對豬附紅細胞體病發生情況進行控制。在母豬分娩前要依照其體重大小，以11 mg/kg體重為標準注射土霉素，能有效防控母豬發病，針對1日齡仔豬每頭注射50 mg土霉素，能對仔豬發病情況進行控制。在藥物防治過程中，針對每千克體重通過靜脈注射10?15 mg新胂凡納明，再應用相同方式注射葡萄糖注射液與維生素C，連續注射3d。在每噸飼料中投入600?800 g土霉素，設定2?3個療程，相關技術人員依照3 mg/kg體重注射相應的四環素。對于患病仔豬，在治療中應用磺胺-5-甲氧嘧啶注射液進行肌肉注射，連續施加1次，連續應用3d。在豬附紅細胞體病患病初期，可應用三氮脒進行防治，但是針對于病重豬效果不佳。生豬每千克體重注入5?7 g三氮脒，通過深度肌肉注射，間隔48 h注射1次。在阿散酸施加中，每噸飼料投入180 g，連續施加1周。

4結束語

通過一例豬附紅細胞體病的實驗室診斷得出，該類疾病在診斷中可應用的方法較多。要結合一例豬附紅細胞體病發病具體現狀采取針對性預防控制措施，降低豬附紅細胞體病發病幾率，提升豬養殖成效。

參考文獻

[1]張喜懿，溫貴蘭，張升波，等.一例豬附紅細胞體病的實驗室診斷[J].貴州畜牧獸醫，2019，43（2）：27-30.

[2]鄢長慶，楊明.一例豬附紅細胞體病的診斷與治療[J].畜牧獸醫科技信息，2018（7）：96-97.

[3]張垂調.一例豬附紅細胞體病的診治[J].福建畜牧獸醫，2016（1）：43.