細胞塊切片免疫組化染色在胸腔積液病理診斷中的應用價值△

張云霞 吳紅芳

(1.河南省南陽醫專第一附屬醫院病理科 南陽 473000；2.河南省南陽醫學高等專科學病理教研室 南陽 473000)

胸腔積液作為檢驗標本，在細胞病理學臨床診斷方面能被高效檢測出病理相關信息等，同時能鑒別出相關疾病的病變類型和病變程度等評估疾病的重要信息[1]。但是由于漿膜腔原發性間皮瘤細胞與轉移性癌細胞的細胞形態極為相似，臨床上過去采用的細胞涂片的處理方式結合免疫檢查的方法很難將這兩類病變細胞準確區別出來。近年研究發現，采用細胞塊切片結合免疫組化染色的檢查方法，能有效區別不同來源和不同程度病變的病變細胞。為探討這一新的病理檢查方式應用在胸腔積液標本檢查的臨床效果，本研究收集相應的胸腔積液標本作如下研究。

1 對象與方法

1.1對象

選取在2016年4月～2017年5月我院收治的胸腔積液病例共76例，對每份標本進行兩種方式處理：細胞塊切片處理和常規細胞涂片處理。研究對象76例中，男37例，女39例，年齡20～74歲，平均年齡(49.4±12.8)歲。在得到患者簽署的知情同意書后開始研究。

1.2方法

(1)每個胸腔積液標本分別取10ml,等量分裝在4個離心管中，確定離心半徑為50cm，以3000r/min的轉速離心10min，分離出部分沉渣處理成簡單的細胞涂片；用10%福爾馬林中性固定液固定試鏡紙包裹剩下的離心沉渣，處理成細胞蠟塊后制成厚度約3μm的細胞塊切片；(2)對所有處理后的標本進行HE染色和免疫組化染色，觀察染色結果中標本呈現出的細胞形態、細胞黏附性以及細胞核不典型性，判斷細胞病變的良性、惡性和不肯定分類；(3)確定待研究的抗原蛋白為： MOC-31(上皮細胞表面糖蛋白)、BerEP4(腫瘤糖蛋白)、CEA(癌胚抗原)、WT-1(Wilm's 腫瘤基因-1)、CD51(整合素蛋白 αV)、Calretinin(鈣結合蛋白)、CK5/6(細胞角蛋白5/6)、Desmin(足細胞結蛋白)、TTF-1(甲狀腺轉錄因子-1)和CK7(細胞角蛋白 7)，并觀察這些蛋白的陽性表達情況。

1.3判斷

每張切片隨機選取5個不重復視野來觀察細胞陽性染色情況，將其中陽性細胞構成比≥10%的情況，記為蛋白表達陽性。 觀察兩種標本處理方法的檢出情況及構成比，并對各選定的抗原蛋白陽性表達情況進行比較分析。

1.4統計分析

用SPSS19.0專業統計軟件對所有評分結果進行分析，判斷兩組的病理檢測結果是否具有差異及差異的有效性。

2 結果

2.1病理診斷結果對比

常規細胞涂片組和細胞塊切片組的陽性檢出率[24(31.58%) VS 26(34.21%)]差異明顯，其中，常規細胞涂片組的不能確定診斷結果的占比偏高[26(34.21%) VS 0%](χ2=33.66，P<0.05)。

2.2抗原蛋白陽性表達情況對比

原發性間皮瘤WT-1、CK5/6、Desmin、Calretinin陽性表達率較高，而CK7、TTF-1、MOC-31、CEA 、BerEP4、CD51陽性表達率均較低；轉移性癌檢查中，兩組蛋白陽性表達率的規律與前者剛好相反，見表1。

3 討論

免疫組化染色法是運用已標記的特異性抗體以檢測細胞中的未知抗原，且利用酶形成的著色反應來反映其活性、位置以及分布情況[1]。該診斷方法的操作簡單，陽性物質定位精確，特異性較強，且細胞塊的運用有效解決了常規細菌涂片方法的的單一性問題，可完整保存細胞標本，連續切片性質明顯，有助于對細胞標本進行多項檢查。細胞塊切片處理法結合結合免疫組化法檢查診斷胸腔積液標本時，由于處理過程中的石蠟包埋、切片等操作，相對于常規細胞涂片處理操作，提高了病理檢查結果的準確度[2]。更重要的是，細胞塊制作簡單，易于儲存，檢測過程中可有效避免交叉反應，敏感性與特異性均較高，可在各大基層醫院中開展。本研究顯示，細胞塊切片結合免疫組化法能有效診斷出疾病的表達率：常規細胞涂片組的檢出率為65.79%，細胞塊切片組檢出率為100%；并且在間皮腫瘤標本中，CK7、TTF-1、MOC-31、CEA、CD51、BerEP4蛋白的陽性表達率均較低，而WT-1、CK5/6、Calretinin、Desmin 蛋白的表達率較高，在轉移性癌變標本中，目標抗原陽性表達規律相反。細胞塊切片處理結合免疫組化法病理檢查能有效區分癌變疾病的原發性或轉移性來源，具有重要的疾病輔助診治意義[3]。綜上所述，在胸腔積液病理診斷中，細胞塊切片結合免疫組化法能準確、高效檢測出是否發生癌變疾病及癌變的來源。

表1 兩組標本檢測的抗原蛋白表達情況對比統計

抗原蛋白良性惡性不確定涂片(26)細胞塊(50)轉移性癌惡性間皮瘤涂片(18)細胞塊(25)涂片(6)細胞塊(1)涂片(26)細胞塊(0)WT-122503231210Desmin20482151240CK5/621491141150Calretinin25500051250MOC-310217110030CK77114243030TTF-10116240000CD510315230000CEA7318220020BerEP40217230000